Question

12．在农业生产中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可导致土壤污染．
（1）为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

①要在长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是在无氮固体培养基中添加了该除草剂．
②在划线培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是培养液中缺少这些细菌可利用的氮源或有氧条件抑制了这些细菌的生长．
③在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是氮气，有透明带菌落利用的氮源主要是该除草剂，据此可筛选出目的菌．
（2）为了生产用于治理该除草剂污染的微生物制剂，科研工作者研究了目的菌群体生长的规律，绘制出该细菌的生长速率曲线（如图2）．下列有关说法正确的是A．
A．上述目的菌是在恒定容积的液体培养基中培养的
B．扩大培养最好选择b时期的细菌接种，但此期最后阶段细菌数量已减少
C．c时期的细菌不再进行繁殖，有芽孢生成
D．d时期生活的细菌已经不能再合成初级代谢产物．

Answer 1

分析 1、从土壤中筛选分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株．筛选能降解该除草剂的细菌需要以该除草剂为唯一的氮源的选择培养基．
2、图示是筛选分离能降解该除草剂的细菌的过程，所用的接种方法是平板划线法．
3、图2中，a表示调整期，b表示对数期，c表示稳定期，d表示衰亡期．

解答 解：（1）①目的菌的特点是能够降解除草剂（含氮有机化合物），培养基的营养要求为用不含氮选择培养基，同时由图中可知分离菌种选用的是固体平板划线法，故从物理性质和用途方面来看，培养基的特点为加入除草剂，不加其他氮源的固体培养基．
②因不含有其他氮源，大多数细菌不能正常在此培养基上生长．
③除草剂被分解有透明带，有透明带的菌落利用该除草剂为氮源，无透明带但能够在无氮培养基上生长的菌落，并不能够分解除草剂，但可利用氮气为氮源，由此筛选目的菌．
（2）A、根据图中曲线微生物的生长速率的变化规律可知，该细菌先增长后稳定再降低，说明目的菌是在恒定容积的液体培养基中培养的，A正确；
B、b为对数期，b时期菌体数量呈指数增长，c为稳定期，B错误；
C、c时期的细菌仍然能够增殖，只是出生率等于死亡率，C错误；
D、初级代谢产物在各时期都能够生成，D错误故选：A．
故答案为：
（1）①在无氮固体培养基中添加了该除草剂　②培养液中缺少这些细菌可利用的氮源　③氮气　该除草剂
（2）A

点评 本题主要考查微生物培养的相关知识，意在强化微生物培养的所以操作过程，提高学生实验技能．