Question

（2015秋•长春校级月考）为研究水稻D基因的功能，研究者将T﹣DNA插入到D基因中，致使该基因失活，失活后的基因记为d．现以野生植株和突变植株作为亲本进行杂交实验，统计母本植株的结实率，结果如下表所示．

杂交编号	亲本组合	结实数/授粉的小花数	结实率
①	♀DD×♂dd	16/158	10%
②	♀dd×♂DD	77/154	50%
③	♀DD×♂DD	71/141	50%

（1）表中数据表明，D基因失活使 配子育性降低．为确定配子育性降低是由于D基因失活造成的，可将 作为目的基因，与载体连接后，导入到 （填“野生”或“突变”）植株的幼芽经过 形成的愈伤组织中，最后观察转基因水稻配子育性是否得到恢复．

（2）用 观察并比较野生植株和突变植株的配子形成，发现D基因失活不影响二者的 分裂．

（3）进一步研究表明，配子育性降低是因为D基因失活直接导致配子本身受精能力下降．若让杂交①的F1给杂交②的F1授粉，预期结实率为 ，所获得的F2植株的基因型及比例为 ．

（4）为验证F2植株基因型及比例，研究者根据D基因、T﹣DNA的序列，设计了3种引物，如图所示：

随机选取F2植株若干，提取各植株的总DNA，分别用引物“Ⅰ+Ⅲ”组合及“Ⅱ+Ⅲ”组合进行PCR，检测是否扩增（完整的T﹣DNA过大，不能完成PCR）．若 ，则相应植株的基因型为Dd；同理可判断其他基因型，进而统计各基因型比例．

（5）研究表明D基因表达产物（D蛋白）含有WD40（氨基酸序列），而通常含有WD40的蛋白都定位在细胞核内．为探究D蛋白是否为核蛋白，研究者将D基因与黄色荧光蛋白基因融合；同时将已知的核蛋白基因与蓝色荧光蛋白基因融合．再将两种融合基因导入植物原生质体表达系统，如果 ，则表明D蛋白是核蛋白．

Answer 1