Question

18．人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得，具体操作流程如图．请回答下列问题：

（1）构建重组表达载体需要使用的工具酶是限制酶和DNA连接酶．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或基因检测）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能处理，才具备受精能力．
（3）将目的基因导入受精卵常用的方法是显微注射法．为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，该操作宜选用囊胚期的滋养层细胞进行．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞具有很高的全能性；胚胎分割时，应将囊胚的内细胞团进行均等分割．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）构建基因表达载体时，首先需要同种限制酶切割外源DNA分子和运载体，其次需要DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA分子．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术．
（2）对供体母羊注射促性腺激素可促使其超数排卵．采集的精子需要经过获能处理才具备受精能力．
（3）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，该操作宜选用囊胚期的滋养层细胞进行．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞具有很高的全能性；胚胎分割时，应将囊胚的内细胞团进行均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育．
（4）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
故答案为：
（1）限制酶   DNA连接酶     DNA分子杂交（或基因检测）
（2）超数排卵  获能  
（3）显微注射法   性别鉴定   滋养层  全能   内细胞团
（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

点评 本题结合转htPA基因母羊的培育过程图，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．