Question

【题目】【加试题】

Ⅰ．转基因克隆猪已在我国培育成功。研究组首先从猪胚胎皮肤细胞中分离出纤维细胞，进行体外培养。通过电穿孔的方法将构建好的基因表达载体转入纤维细胞，经筛选后将转基因纤维细胞进行体细胞克隆，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫内，最终获得转基因克隆猪。请回答：

（1）在对猪纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的 ，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止 对细胞自身造成危害。

（2）筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的 。

（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集 ，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞核注入 中，再经过一系列过程获得含有目的基因的重组胚胎。

（4）为了提高重组胚胎的利用率，可对处于 阶段的胚胎进行均等分割，再将重组胚胎移入代孕母猪子宫中继续发育成转基因克隆猪。一般地，代孕母猪需要用激素处理处理，促使其 以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源。现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答：

（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有 （至少答2种）。

（2）可用 法分离纯化得到能降解尿素的菌种。在接种活菌的过程中，要在 旁进行操作，接种后的培养皿 于37℃的 中培养。

（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，若培养基中存在分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的 使PH升高，使酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株以尿素为氮源。变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力 。

Answer 1

【答案】Ⅰ

（1）抗生素 细胞代谢产物积累

（2）标记基因

（3）卵母细胞 去核卵细胞

（4）桑椹胚或囊胚 同期发情

Ⅱ

（1）高压蒸气灭菌、灼烧灭菌（或干热灭菌）

（2）涂布分离 或划线分离 酒精灯倒置 恒温培养箱

（3）氨 越强

【解析】Ⅰ．（1）在对纤维细胞进行培养时，需要在细胞培养液中添加一定量的抗生素，以防止培养过程的污染。此外，应定期更换培养液，防止细胞代谢产物的积累对细胞自身造成危害。

（2）筛选转基因细胞时，需要用到基因表达载体中的标记基因。

（3）在进行体细胞克隆前，先要从屠宰场收集猪卵巢，采集卵母细胞，并在体外培养成熟。然后将转基因纤维细胞注入到去核卵母细胞中，再经过一系列过程获得含有目的基因重组胚胎。

（4）为了提高重组胚胎的利用率，可以对处于桑椹胚或囊胚阶段的胚胎进行均等分割。将重组胚胎移入到受体子宫后，由于受体子宫不会对外来胚胎发生免疫排斥反应，并能与之建立正常的生理和组织上的联系，因此，重组胚胎能在受体子宫中继续发育成转基因克隆猪。

Ⅱ．⑴常用的灭菌方法有高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌和干热灭菌。

⑵在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在酒精灯火焰旁进行操作，防止杂菌污染；接种后的培养皿倒置于37℃的恒温培养箱中培养，培养皿倒置既可避免培养基中的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染，恒温为微生物的快速生长提供温度条件。

⑶含有酚红指示剂的培养基从功能上划分该培养基属于鉴别培养基；尿素被分解产生的氨使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化；变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力越强。