Question

【题目】“地沟油，城市下水道里悄悄流淌的垃圾”。地沟油最大的来源为城市饭店下水道的隔油池。对地沟油的处理是一个难题，用脂肪酶处理地沟油具有广泛的应用前景。为获得高产脂肪酶的菌株，并将之用于产业化，某研究小组进行了一些实验。请回答下列相关问题：

(1)欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，应配制________碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于________培养基。

(2)经过稀释，在平板上接入0.1 mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能有________、__________________。

(3)经上述实验得到如下表所示的结果，为保证结果准确，一般选择________稀释倍数的平板进行统计。有同学认为稀释操作时，可以将1 mL培养液加适量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，这样可以简化步骤，省去梯度稀释的麻烦。你认为这种方法是否合理并说明理由。____________

稀释倍数	101	102	103	104	105	106
培养 结果
计数(平均值)	难以计数	难以计数	难以计数	159	17	2

(4)如果脂肪酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择右表中的________法固定化工艺。使用分泌脂肪酶细菌与固定化脂肪酶进行生产，都需要适宜的________(填入下面选项的序号)。

①温度　　②水　　③营养　　④pH

Answer 1

【答案】以脂肪为唯一(碳源)　 选择 有的菌落是由2个以上的细菌形成的 涂布器上还残留少量细菌 104　 不合理(否) ，在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30～300之间 包埋(法) ①②④

【解析】

本题考查微生物的实验室培养、酶的活性实验和固定化酶技术的有关知识，意在考查考生识图能力和能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题的能力；能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论；考查理论联系实际，综合运用所学知识解决自然界和社会生活中的一些生物学问题的能力。

(1) 欲分离筛选出能分泌脂肪酶的细菌，要在培养基中加入特定的碳源，应配制以脂肪为唯一碳源的培养基，这种培养基从功能上看属于选择培养基。

(2)在平板上接入稀释液并涂布，培养后，在平板上计数菌落，据此计算每毫升培养液中的活菌数。由于可能有的菌落是由2个以上的细菌形成的，也可能涂布器上还残留少量细菌，故这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小。

(3) 为保证结果准确，一般选择104稀释倍数，稀释操作时，将1 mL培养液加适量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，因为在做梯度稀释之前不能确定这个稀释倍数的每个平板的菌落是否在30～300之间，故这种方法不合理。

（4）如果脂肪酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择表中的包埋法固定化工艺，因包埋法酶活力损失小，与载体结合力强，成本适中，符合产业化的要求。使用分泌脂肪酶细菌与固定化脂肪酶进行生产，需要适宜的温度、水、pH等，保证细菌正常生活，酶的最适温度和酸碱度。