Question

天然酿酒酵母菌通常缺乏分解淀粉的酶类，用作发酵原料的淀粉需经一系列复杂的转化过程才能被利用．研究者从某丝状真菌中获取淀粉酶基因并转入酿酒酵母菌，获得的酿酒酵母工程菌可直接利用淀粉产生酒精．请回答下列问题：

（1）将淀粉酶基因切割下来所用的工具是 ，用 将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子，此表达载体除目的基因外，必须含有 、 和标记基因．

（2）若要鉴定淀粉酶基因是否插入酿酒酵母菌，可采用的检测方法 ，该项方法要用 作探针进行检测；若要鉴定淀粉酶基因是否翻译成淀粉酶，可采用 方法检测．

（3）采用PCR技术可对目的基因进行体外扩增．该反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水、4种dNTP、模板DNA、引物和 ．其中引物有 种，实质是 ，假如引物都用3H标记，从理论上计算循环4次，所得DNA分子中含有3H标记的占 ．

（4）已知BarnHⅠ与BglⅡ的识别序列及切割位点如图所示，用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BarnHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作，若干循环后 序列明显增多．

Answer 1