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    8．三孢布拉氏霉菌具有β一胡萝卜含量高、易于培养等特点而广泛用于工业化β一胡萝卜素的生产．下图1是在发酵罐内三孢布拉氏霉菌菌体生物量及β一胡萝卜素产量随时间变化曲线图．图2是样品层析结果及与β胡萝卜素标准样的比对．请回答下列问题：

    （1）用稀释涂布平板法筛选和纯化三孢布拉氏霉菌，配制浓度梯度为10-1的系列稀释液时，需用移液管将1mL．菌液移入盛有9mL蒸馏水的试管中．对同一浓度的生产菌稀释液，分别用血球计数板计数和稀释涂布平板法计数，若不存在实验错误操作，则后者的数量少于前者，其原因是稀释涂布平板法中两个细菌可能长成一个菌落．
    若要所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应该保持待测样品稀释的稀释度．
    （2）图2为萃取的胡萝卜素样品通过纸层析进行鉴定的结果，从图中分析可知，色带Ⅰ为β胡萝卜素．出现样品2的结果，可能原因有：
    ①在萃取过程中B（A．萃取温度高，时间长/B．干燥温度高，时间长）；
    ②在鉴定过程中A（A．未经浓缩蒸馏/B．点样太快，样点小）．
    （3）根据胡萝卜素分子中碳碳双键的数目可将胡萝卜素分为α、β、γ三种．一分子β-胡萝卜素在人体内可被氧化成两分子的维生素A，因此，β-胡萝卜素可以用来治疗夜盲症等疾病．
    （4）培养三孢布拉氏霉菌时，培养基中的营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐四大类．为了获利高产菌株的单个菌落，接种时可用接种环在固体培养基上进行（平板）划线操作．
    （5）让高产菌落株大量繁殖的过程叫菌种培养，大量产生胡萝卜素的过程叫发酵培养．这两个过程中，发酵培养的培养基中碳/氮比例更高，原因是胡萝卜素中含有碳和氢、不含氮，三孢布拉氏霉菌产生胡萝卜素需要大量碳源．

    分析 1、据图分析：图1中，在发酵罐内利用三孢布拉氏霉发酵生产β-胡萝卜素过程中，β-胡萝卜素产量应该是三孢布拉氏霉处于稳定期时进行连续培养时获得的产量最高．图2表示用纸层析法鉴定胡萝卜素的实验过程．
    2、微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等，培养基需要进行高压蒸汽灭菌法灭菌．微生物处于稳定期时连续培养可以得到最多的发酵产物．胡萝卜素不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂，常用萃取法提取．

    解答 解：（1）进行梯度稀释时，需要将1mL菌液移入盛有9ml的无菌水中．使用稀释涂布平板法进行微生物计数时，两个连在一起的细菌会长成一个菌落，而导致结果可能会偏小．为计数活菌数，要多次实验求平均值、操作要严格，还要保证样品稀释度，便于检测．
    （2）据图分析，色素带Ⅰ与标准样色素带一致，故其为β胡萝卜素，出现样品2的结果，可能原因是在操作过程中干燥温度高，时间长或未经浓缩蒸馏．
    （3）根据碳碳双键的数目可将胡萝卜素分为α、β、γ三类，β-胡萝卜素是其中最主要的组成成分．一分子β一胡萝卜素在人体内可被氧化成两分子的维生素A，因此，β-胡萝卜素可以用来治疗夜盲症等疾病．
    （4）培养三孢布拉氏霉菌时，培养基中的营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐四大类．为了获得高产菌株的单个菌落，接种时可用接种环在固体培养基上进行（平板）划线．操作，为了使聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，进行该操作时应该特别注意两点，一是每次划线前都要灼烧接种环（并待其冷却），二是下一次划线都要从上一次划线的末端开始．
    （5）让高产菌株大量繁殖的过程叫菌种培养，大量产生胡萝卜素的过程叫发酵培养．胡萝卜素中含有碳和氢、不含氮，三孢布拉氏霉菌产生胡萝卜素需要大量碳源，因此发酵培养的培养基中碳/氮比例更高．
    故答案为：
    （1）9   稀释涂布平板法中两个细菌可能长成一个菌落       稀释度
    （2）Ⅰ①B   ②A 
    （3）碳碳双键     维生素A
    （4）无机盐    （平板）划线
    （5）发酵培养        胡萝卜素中含有碳和氢、不含氮，三孢布拉氏霉菌产生胡萝卜素需要大量碳源

    点评 本题主要考查胡萝卜素的提取和鉴定，意在强化学生对相关知识的识记、理解与运用．

    练习册系列答案
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    13．为验证酶的催化特性，有人做了以下实验．准备以下1-5支试管（容量20mL），分别装入下列物质，观察在不同条件下的反应情况．
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    ④4号试管中加入3%的5mLH2O2后，再加入1g熟猪肝，置于0℃温度下；
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    （1）图中①环节所需的微生物大多分布在富含纤维素环境中，筛选该微生物的方法是刚果红染色法．图中②环节获得的酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种成分，即C1酶Cx酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖．
    （2）纸张加工过程中，有时加入一些由植物芳香油制成的香精，水蒸气蒸馏法（或蒸馏法）你是植物芳香油提取的常用方法；也可以用植物色素使纸张着色，根据植物色素易溶于有机试剂的特点，可以考虑使用萃取方法提取植物色素．
    （3）④过程要注意对接种器材进行灭菌，⑤环节常用的菌种是酵母菌，产生酒精的过程中，要注意对发酵装置进行密闭（或者保证无氧条件）．

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