Question

15．单克隆抗体可用于疾病诊断和治疗，制备H7N9病毒单克隆抗体的流程如图：

（1）过程③常用的方法是显微注射．
（2）向小鼠体内注射抗原蛋白，使小鼠产生体液免疫．从小鼠体内分离的细胞I是B细胞（或浆细胞或已免疫的B细胞），细胞II应具有的特点是既能无限增殖，又能产生特异性抗体．
（3）体外培养细胞II，首先应保证其处于无菌、无毒的环境，其次需要提供充足的营养和适宜的温度，通常需加入血清、血浆等天然成分；为了保证气体环境，培养箱中的气体组成为95%空气加5%CO₂．
（4）细胞融合后需在选择性（HAT）培养基筛选出细胞II，然后对细胞II还需进行的操作是克隆化培养和抗体检测．
（5）若要预防H7N9禽流感，可用图中的H7N9抗原蛋白作为疫苗．

Answer 1

分析 1、基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．基因表达载体的组成包括：目的基因、启动子、终止子和标记基因等．目的基因导入动物细胞的方法是显微注射法．检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术．
2、单克隆抗体的制备流程：人工诱导经过免疫的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，再经筛选获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，通过培养获得的杂交瘤细胞得到单克隆抗体．
3、动物细胞培养需要满足以下条件
（1）充足的营养供给--微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等．
（2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理．通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染．此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害．
（4）气体环境：95%空气+5%CO₂．O₂是细胞代谢所必需的，CO₂的主要作用是维持培养液的pH．

解答 解：（1）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．
（2）向小鼠体内注射抗原蛋白，使小鼠产生相应的浆细胞，这是体液免疫，从小鼠体内分离的细胞Ⅰ是B细胞（浆细胞或已免疫B细胞），将无限增殖的基因导入浆细胞，得到的细胞Ⅱ应具有的特点是既能无限增殖，又能产生特异性抗体．
（3）体外培养细胞Ⅱ，首先应保证其处于的无菌无毒环境，其次需要提供充足的营养、适宜的温度，为了保证营养充足，还需要在培养基中加入动物血清、血浆；为了保证气体环境，培养箱中的气体组成为95%空气加5%CO₂．
（4）动物细胞融合后，需要用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；对于转基因成功的细胞Ⅱ还要进行克隆化培养和检测（专一）抗体．
（5）疫苗为毒性弱的抗原，因此要预防H7N9禽流感，可以用图中的H7N9抗原蛋白作为疫苗．
故答案为：
（1）显微注射
（2）体液    B细胞（或浆细胞或已免疫的B细胞）    既能无限增殖，又能产生特异性抗体
（3）无菌、无毒    血清、血浆    95%空气加5%CO₂
（4）选择性（HAT）    克隆化培养和抗体检测
（5）H7N9抗原蛋白

点评 本题考查基因工程和单克隆抗体的制备有关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤；识记单克隆抗体制备的原理、过程，能结合图中信息准确答题．