Question

如图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）构建表达载体需要的酶是：

 

，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、

 

、

 

、终止子和复制原点等．
（2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是

 

．
（3）图中所用的胚胎干细胞来自于

 

．
（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的

 

位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是

 

．
（5）可以使用

 

方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,胚胎干细胞的来源及分化

专题：

分析：分析题图：图示为绿色荧光小鼠制备流程图，其中①表示基因表达载体的构建过程；②表示将表达载体导入胚胎干细胞；③表示胚胎干细胞的体外培养过程；④表示冲卵，即冲出胚胎的过程；⑤表示将胚胎干细胞团注入囊胚；⑥表示胚胎移植过程．

解答： 解：（1）构建表达载体时，先需要用限制酶切割含有目的基因的DNA分子和运载体，还需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组质粒；表达载体包含目的基因（绿色荧光蛋白基因Gfp）、标记基因、启动子、终止子和复制原点等．
（2）步骤③所用的G418是一种抗生素，其作用是筛选出导入目的基因的胚胎干细胞．
（3）胚胎干细胞来自于早期胚胎或原始性腺．
（4）囊胚包括滋养层细胞和内细胞团细胞，其中滋养层细胞将发育成胎盘和胎膜，而内细胞团细胞将发育成各种组织，因此图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的内细胞团位置；图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是同期发情处理．
（5）从分子水平上检测小鼠是否存在绿色荧光蛋白，可采用抗原-抗体杂交法．
故答案为：
（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶      标记基因      启动子
（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞
（3）早期胚胎或原始性腺
（4）内细胞团       同期发情处理
（5）抗原-抗体杂交

点评：本题结合绿色荧光小鼠制备流程图，考查基因工程、胚胎干细胞、胚胎移植等知识，要求考生识记基因工程的工具及操作步骤；识记胚胎干细胞的概念及来源；识记胚胎移植的过程，能结合图中信息答题．