Question

【题目】如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶 EcoRI、 BamHI、SamI的酶切位点，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点，已知目的基因的两端分别有包括coRI、 BamHI、SamI在内的多种酶的酶切位点。外源DNA插入到或中会导致相应的基因失活（表示氨苄青霉素抗性基因，表示四环素抗性基因）。回答下列问题：

（1）基因工程中获取目的基因常用的方法有_______________________（答出两点即可）。

（2）在基因工程中使用的载体除质粒外，还有__________、__________等。构建重组质粒时，为避免出现自身环化，通常选用____________酶对该质粒和目的基因进行切割，质粒被切割后断开了_________个磷酸二酯键。被切割后的质粒和目的基因经DNA连接酶连接后首先导入大肠杆菌中，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用含_____________的培养基进行培养。

（3）将含有目的基因的重组质粒导入植物细胞最常用的方法是__________，为检测目的基因是否在受体细胞中表达，通常选用____________的方法进行分子水平的检测，此外有时还需要进行___________的鉴定。

Answer 1

【答案】从自然界已有物种中分离、人工的方法合成（或从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因、直接人工合成） 噬菌体的衍生物 动植物病毒 4（个） 氨苄青霉素 农杆菌转化法 抗原-抗体杂交 个体生物学水平

【解析】

在基因工程中，一般需要用同一种限制酶切割目的基因和质粒，而图中的质粒上存在三种限制酶的切割位点，其中两种限制酶切割位点均在四环素抗性基因，解答本题应着重围绕这两点有效信息。

（1）基因工程中获取目的基因常用的方法有从自然界已有物种中分离、人工的方法合成（或从基因文库中获取目的基因、利用PCR技术扩增目的基因、直接人工合成）。

（2）基因工程中常用的载体是质粒，除质粒外还有噬菌体的衍生物、动植物病毒都可作为载体。为避免出现自身环化应选择的限制酶是EcoRI、BamHI，质粒被切割后断开4个磷酸二酯键，由于四环素基因被破坏，所以筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用含氨苄青霉素的培养基进行培养。

（3）基因表达载体导入植物细胞最常用的方法是农杆菌转化法，基因表达的产物是蛋白质，检测蛋白质的方法是抗原-抗体杂交，另外还需要从个体生物学水平进行鉴定。