Question

【题目】Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚眙干细胞(ES细胞)对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图(图中数字序号表示的是相关过程)。请回答:

(1)过程①将进行培养的上皮细胞注入去核的卵母细胞中，接受细胞核的卵母细胞应处于__________________时期。

(2)过程②利用的技术是___________________________，当重组胚胎培养到囊胚期时，可从其_________分离出ES细胞，ES细胞在功能上具有______________的特点。

(3)过程③中获取的目的基因是____________________，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建_______________________，构建之前可以根据_______________________设计引物，利用PCR技术对目的基因进行扩增。为了检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因，可采用______________技术。

(4)按此方法和图示技术流程，完成Rag2基因缺失小鼠的基因治疗涉及的酶有___________和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)等。通测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用__________________进行杂交实验。

Answer 1

【答案】MⅡ中 早期胚胎培养 内细胞团 发育的全能性 （正常的）Rag2基因 含（正常的）Rag2基因的基因表达载体 （正常的）Rag2基因的脱氧核苷酸序列（或碱基对序列或遗传信息） DNA分子杂交 限制性核酸内切酶、DNA连接酶和胰蛋白酶 抗Rag2蛋白的抗体

【解析】

1、动物核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。

2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。

3、在基因工程中，目的基因和质粒需要用同种限制酶进行切割，形成相同的黏性末端，再用DNA连接酶连接成重组质粒。

4、目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。

（1）卵细胞体外接受细胞核，卵母细胞需在体外培养到减数第二次分裂中期。

（2）过程②是将重组胚胎进行培养形成早期胚胎，故利用的是早期胚胎培养技术；ES细胞是胚胎干细胞的简称，在囊胚时期分离的内细胞团细胞分离培养；ES细胞在功能上具有发育的全能性。

（3）通过图示可知，将重组的造血干细胞导入缺失Rag2基因的小鼠体内，故过程③中获取的目的基因是Rag2基因，若要将目的基因导入受体细胞，需要构建含（正常的）Rag2基因的基因表达载体，设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计，利用PCR技术对目的基因进行扩增。通过DNA分子杂交技术，检测ES细胞的DNA上是否插入了干扰素基因。

（4）图示③是基因工程，涉及的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶和耐高温的DNA聚合酶(Taq酶)，老鼠上皮细胞分散开可用胰蛋白酶等。检测表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的蛋白质，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。