Question

14．研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达．抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段．
（1）选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织中低表达（填“低表达”或“高表达”）．H蛋白是一个跨膜蛋白，结构如图12所示．制备免疫小鼠用的H蛋白（抗原）时，应构建胞外区基因，转入原核细胞表达并提纯．
（2）将H蛋白注射到小鼠体内，取该小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞进行融合，使用的化学诱导剂是PEG（或“聚乙二醇”），细胞融合的原理是细胞膜的流动性．
（3）将融合细胞在选择培养基中培养，一段时间后培养基中只有杂交瘤细胞生长．将杂交瘤细胞转到多孔培养板上培养，吸取有克隆生长的细胞培养孔中的上清液（填“上清液”或“沉淀细胞”），应用抗原-抗体杂交技术进行抗体阳性检测．经多次筛选，就能得到产生单克隆抗体的杂交瘤细胞．
（4）将筛选得到的杂交瘤细胞，经过体外（培养）或小鼠腹腔内培养，获取大量的单克隆抗体．
（5）治疗乳腺癌时，可单独使用抗H蛋白单克隆抗体，也可将该单克隆抗体与抗癌药物结合构建“生物导弹”，杀死癌细胞．这充分体现了单克隆抗体特异性强（或“识别抗原部位专一”）的特点．

Answer 1

分析 单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体．
诱导动物细胞融合的方法有：物理法（离心、振动）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活的病毒）．

解答 解：（1）根据题意可知，H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达，因此原癌基因的表达产物H蛋白在正常组织中低表达；由于抗体主要存在于细胞外液中，因此根据H蛋白的结构图可知，若用H蛋白制备抗原需要利用胞外区基因，由制备获得的抗体作用于该抗原的胞外区．
（2）在制备单克隆抗体过程中，需要将脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，诱导其融合的试剂为聚乙二醇，其融合的原理是借助于细胞膜的流动性．
（3）将融合细胞接种在选择培养基中，从中选出杂交瘤细胞，由于抗体蛋白质相对质量较轻，又因为抗体由细胞分泌出细胞，因此需要在吸取有克隆生长的细胞培养孔中的上清液，利用抗原-抗体杂交技术最后选出产生单克隆抗体的杂交瘤细胞．
（4）将杂交瘤细胞经过体外培养或小鼠腹腔内培养，获得大量的单克隆抗体．
（5）单克隆抗体的优点是特异性强，灵敏度高．
故答案为：
（1）低表达   胞外
（2）骨髓瘤     PEG（或“聚乙二醇”）  细胞膜的流动性
（3）选择   上清液   抗原-抗体杂交
（4）体外（培养）
（5）特异性强（或“识别抗原部位专一”）

点评 本题结合抑制癌症的材料考查了单克隆抗体的相关知识，要求考生能够从题干和题图中获取有效解题信息；识记单克隆抗体的制备过程以及细胞融合的诱导技术，识记单克隆抗体的优点等方面的知识．