基因工程利用某目的基因（图甲）和Pl噬菌体载体（图乙）构建重组DNA。限制性核酸内切酶的酶切位点分别是BglⅡ、EcoR I和Sau3A I。下列分析错误的是

A.
构建重组DNA时，可用BglⅡ和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
B.
构建重组DNA时，可用EcoR I和Sau3A I切割目的基因和Pl噬菌体载体
C.
图乙中的P1噬菌体载体只用EcoR I切割后，含有2个游离的磷酸基团
D.
用EcoR I切割目的基因和P1噬菌体载体，再用DNA连接酶连接，只能产生一种重组DNA

D
试题分析：P1噬菌体载体是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团，从图2可以看出，质粒上只含有一个SmaⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团；C正确。从图甲看出，用EcoR I切割目的基因后两端各有一切口，与图乙中EcoR I切口对接时，可有两种可能，即可产生两种重组DNA；D错误。
考点：本题考查基因工程的相关知识，是学生提升获取图示信息、审题、分析能力的较好选择。

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降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，将人工合成的降钙素DNA与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功的在大肠杆菌中得以表达。操作大体过程如下图1、图2，据图回答下列问题：

（1）图1示人工合成降钙素DNA的过程。从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。从功能看，Klenow酶是一种___________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。
（2）图2将重组质粒导入大肠杆菌最常用的方法是用       处理，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（3）如果要通过基因工程获得转基因动物，将目的基因导入受体细胞最常用的方法是             。
（4）以下关于蛋白质工程的说法正确的是（  ）
A．蛋白质工程以基因工程为基础
B．蛋白质工程就是酶工程的延伸
C．蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造
D．蛋白质工程只能生产天然的蛋白质

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科目：高中生物 来源：2015届吉林省高二上期期末考试生物卷（解析版） 题型：综合题

请回答基因工程方面的有关问题：

(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链 DNA 片段，它是子链合成延伸的基础。

①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物 A 的 DNA 片段所占的比例为________。

②在第________轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的 DNA 片段。

(2)设计引物是 PCR 技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。

①第 1 组：________________________；

②第 2 组：________________________。

(3)PCR反应体系中含有热稳定 DNA 聚合酶，下面的表达式不能正确反映 DNA 聚合酶的功能，这是因为____________________________________________________________。

(4)用限制酶 EcoRV 、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的 DNA 片段长度如下图(1 kb 即 1 000 个碱基对)，请画出质粒上 EcoRV 、MboⅠ的切割位点。

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科目：高中生物 来源：2012-2013学年浙江省高三高考仿真模拟理科生物试卷 题型：综合题

肺细胞中的let一7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let一7基因导入肺癌细胞实现表达增强后，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

(1)进行过程①时，需用酶切开载体以插入let一7基因。进行过程②时，需用酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于细胞培养。采用PCR技术扩增let一7基因时，在PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg²⁺)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、耐高温的DNA聚合酶和引物l和引物Ⅱ等，若在该反应体系中，目的基因扩增了5代，则具有引物I的DNA所占的比例理论上为。

(2)研究发现，let一7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取进行分子杂交，以直接检测1et一7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中 (RASmRNA／RAS蛋白质)含量减少引起的。

(3)现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子，用限制酶切开后得到仍是长度为1000 bp的DNA分子，说明此DNA分子的形态为。

(4)某线性DNA分子分别用限制酶Hind Ⅲ和Sma I处理，然后用这两种酶同时处理，得到如下片段(kb为千个碱基对)：

限制酶	片段及长度
Hind Ⅲ	2.5 kb，5.0 kb
Sma I	2.0 kb，5.5 kb
Hind Ⅲ和Sma I	2.5 kb，3.0 kb，2.0 kb

可以推知限制酶Hind Ⅲ和Sma I在此DNA分子中分别有个识别序列。两酶同时处理后得到的片段，再用限制酶EcoR I处理，结果导致凝胶上3．0 kb的片段消失，产生一种1.5 kb的新片段；那么如果用限制酶HindⅢ和EcoR I将该线性DNA分子进行切割，则可得到长度分别为的片段。

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科目：高中生物 来源：2014届湖南省益阳市高二上学期期末考试理科生物试卷（解析版） 题型：综合题

降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，将人工合成的降钙素DNA与大肠杆菌的DNA分子进行重组，并成功的在大肠杆菌中得以表达。操作大体过程如下图1、图2，据图回答下列问题：

（1）图1示人工合成降钙素DNA的过程。从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA。从功能看，Klenow酶是一种___________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。

（2）图2将重组质粒导入大肠杆菌最常用的方法是用处理，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。

（3）如果要通过基因工程获得转基因动物，将目的基因导入受体细胞最常用的方法是。

（4）以下关于蛋白质工程的说法正确的是（）

A．蛋白质工程以基因工程为基础

B．蛋白质工程就是酶工程的延伸

C．蛋白质工程就是用蛋白酶对蛋白质进行改造

D．蛋白质工程只能生产天然的蛋白质

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科目：高中生物 来源：2010年广东省高二上学期期中考试生物试卷 题型：综合题

（每空2分，共11分）请分析回答基因工程的相关问题：

（1）（3分）基因工程的理论基础是法则，可用公式（图解）表示为

。?

（2）（4分）利用PCR技术（全称：）可以扩增目的基因，即在试管中进行DNA的人工复制获得大量DNA克隆分子。某样品DNA中共含有3000个碱基对，碱基数量满足：（A+T）：（G+C）=1 ：2，现计划通过PCR得到100个与样品相同的DNA，至少需要向试管中加入个腺嘌呤脱氧核苷酸。

（3）（4分）为了解基因结构，通常选取一特定长度的线性DNA分子，先用一种限制酶切割，通过电泳技术将单酶水解片段分离，计算相对大小；然后再用另一种酶对单酶水解片段进行降解，分析片断大小。下表是某小组进行的相关实验。

已知一线性DNA序列共有5000bp（bp为碱基对）	第一步水解	产物（单位bp）	第二步水解	产物（单位bp）
A酶切割	1900	将第一步水解产物分离后，分别用B酶切割	1700 200
1500	800 700
1600	1100 500

由实验可知，在这段已知序列上，A酶与B酶的识别序列分别为个和个。

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