Question

【题目】科学家把编码霍乱毒素的无毒性β链基因转移到苜蓿细胞后培育出转基因苜蓿。其具体过程如下：

（1）构建重组DNA分子常用的工具酶是____________和____________。

（2）图中过程②采用的方法是____________，Ti质粒的T—DNA上有一个tms片段能促进生长素的大量合成，在对Ti质粒改造时____________（填“应该”或“不应该”）将该片段去除。

（3）该实验中将农杆菌转入苜蓿细胞的原生质体后，需再生细胞壁。请从理论上提出两种实验室检测原生质体是否再生出细胞壁的方法：①________________________；②________________________。

（4）把含有目的基因的苜蓿细胞培养成幼苗时，细胞先后经过__________、__________两个重要阶段。

Answer 1

【答案】 限制酶 DNA连接酶 农杆菌转化法 应该 将细胞置于高渗溶液中，用显微镜观察是否发生质壁分离 将细胞置于清水中，用显微镜观察是否破碎 脱分化 再分化

【解析】试题分析：本题考查基因工程、细胞工程、质壁分离实验，考查对基因工程操作步骤、组织培养过程、质壁分离实验的理解和应用。解答此题，可根据质壁分离的原理检测原生质体是否再生出细胞壁。

（1）构建重组DNA分子需要用同种限制酶切割目的基因和质粒，并用DNA连接酶进行链接。

（2）图中过程②采用的方法是培育转基因植物常用的农杆菌转化法，在对Ti质粒改造时应该将T—DNA上促进生长素大量合成的tms片段去除，避免T—DNA进入受体细胞后引起细胞快速分裂和生长，形成肿瘤。

（3）细胞壁对植物细胞具有支持和保护作用，检测原生质体是否再生出细胞壁，一种方法是将细胞置于高渗溶液中，用显微镜观察细胞是否因失水导致质壁分离，另一种方法是将细胞置于清水中，用显微镜观察细胞是否因大量吸水而涨破。

（4）含有目的基因的苜蓿细胞在组织培养过程中先后经过脱分化和再分化两个阶段，最后发育为幼苗。