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    以下为人工合成reAnti基因，转入猪成纤维细胞，做成转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答

    (1)人工合成的reAnti基因可通过________ _________技术手段体外迅速扩增。

    (2)过程③要将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞的方法是 ，重组质粒导入之后，可通过 技术，来检测reAnti基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体DNA上。

    (3)从猪中取胎儿成纤维细胞，用 处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含 （要求写清楚每种气体所占比例）的混合气体培养箱中进行培养，培养液的配方通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素等，一般还应添加 。

    (4)去核前的卵母细胞应培养到 期。其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞。再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚胎。

     

    （1）PCR (2)显微注射法 DNA分子杂交

    （3）胰蛋白酶 95%的空气和5%CO2 动物血清 （4）减数第二次分裂中期

    【解析】

    试题分析：（1）基因表达载体包括目的基因、标记基因、启动子和终止子，所以构建的重组质粒除了要有reAnti基因和标记基因外，还要有启动子和终止子．体外迅速扩增用PCR。

    （2）动物基因工程目的基因导入常用显微注射法，目的基因（reAnti基因）是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体上，可用DNA分子杂交技术进行检测。

    （3）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使动物细胞分散成单个细胞．动物细胞培养时要放入到95%的空气（保证细胞代谢）和5%CO2（调节培养液的PH）培养箱中，动物血清在该过程很重要。

    （4）去核前的卵母细胞应培养到减数第二次分裂中期才成熟，其去核后与成纤维细胞通过电刺激后融合，形成重组细胞，再利用物理或化学方法刺激，使之完成细胞分裂和发育，在体外培养成重组早期胚。

    考点：本题考查基因工程、动物细胞培养和核移植的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络的能力；能运用所学知识，解决生物学问题的能力．

     

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    B．后一种方法依据的原理是染色体结构变异

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