Question

9．如图为三种质粒和一个含目的基因的片段的示意图．复制原点是质粒能正常复制的必需组成．图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lcZ为蓝色显色基因，lacZ正常表达菌落呈蓝色．EcoRⅠ、PvuⅠ为相应的限制酶切割位点，括号内的数据是该切点与复制原点的距离，单位为kb（1kb=1000个碱基对）．回答下列问题：

（1）用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒质粒B（填“质粒A”“质粒B”或者“质粒C”），选择的限制酶是PvuⅠ．
（2）转录的起始部位称为启动子，是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别与结合的部位．
（3）如果选择的质粒与目的基因重组成功，并且在受体细胞中能正常表达，则所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入氨苄青霉素，形成的菌落颜色为白色．

Answer 1

分析 分析题图：基因表达载体由启动子、终止子、标记基因和目的基因组成．质粒A中缺少标记基因，质粒C中的复制原点会被酶PvuⅠ切割，所以用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒B．

解答 解：（1）含有目的基因的外源DNA中含有两种限制酶的切割位点，但用限制酶EcoRⅠ切割会破坏目的基因，因此只能选择限制酶PvuⅠ进行切割．质粒A中缺少标记基因，质粒C中的复制原点会被酶PvuⅠ切割，所以用图中的目的基因与质粒构建基因表达载体时，应该选择质粒B．
（2）转录的起始部位称为启动子，是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结构的部位．
（3）质粒长度为2.7kb，目的基因长度为4.0kb，所以重组质粒长度为6.7kb，目的基因与运载体重组时可能会正向连接，也可能会反向连接，因此所形成的重组质粒用EcoRⅠ完全酶切，并进行电泳观察，可出现的片段长度有3.6kb、3.1kb或1.1kb、5.6kb．
（4）用限制酶PvuⅠ切割会破坏质粒B中的lcZ基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入大肠杆菌后，为了筛选出含目的基因的大肠杆菌，在普通琼脂培养基中还需加入氨苄青霉素，形成的菌落颜色为白色．
故答案为：
（1）质粒B              PvuⅠ
（2）启动子                识别与结合
（3）3.6kb、3.1kb         1.1kb、5.6kb
（4）氨苄青霉素          白色

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合图中信息准确答题．