Question

16．科学家研究发现绒山羊的羊绒质量与毛角蛋白Ⅱ型中间丝（KIFⅡ）基因密切相关，获得转KIFⅡ基因的高绒质绒山羊的简单流程如图1所示．图2表示KIFⅡ基因与pZHZ1质粒构建重组质粒的过程，A、B、C、D为四种识别切割序列完全不同的限制酶的酶切位点．已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb（1kb=1000对碱基），其中A～B区域长度为0.8kb，B～C区域长度为0.2kb，C～D区域长度为0.5kb．请回答下列问题：

（1）图1中构建的重组表达载体，目的基因的上游应有启动子，驱动基因的转录．
（2）在图1过程③中，用促性腺激素处理以获取更多的卵（母）细胞，这些卵（母）细胞需在体外培养到减数第二次分裂中期期，方可进行过程④的操作．
（3）图1中过程④采用的生物技术是细胞核移植，得到的重组细胞发育为早期胚胎后，可通过胚胎分割技术获得较多胚胎．
（4）现分别用限制酶A、D切割图2中重组质粒pZHZ2样品，结果被酶A切割成1.7kb和3.4kb两个片段，被酶D切割成1.9kb和3.2kb两个片段．据此判断KIFⅡ基因大小为1.6kb，并请将目的基因内部的酶D切割位点用相应的字母（D）标注在图3中．

Answer 1

分析 分析图1：图中①表示基因表达载体的构建，一般将目的基因与运载体利用限制酶和DNA连接酶构成重组质粒；过程②表示利用动物细胞培养技术培养受体细胞；过程③为通过超数排卵的方法获得更多的卵细胞，过程④表示细胞核移植过程．
分析图2：图2表示基因表达载体的构建过程．

解答 解：（1）图1中构建的重组表达载体，其组成包括目的基因、启动子、终止子、标记基因，其中目的基因的上游应有启动子，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因的转录．
（2）用促性腺激素可对动物进行超数排卵处理．卵母细胞需在体外培养到减数第二次分裂中期才成熟．
（3）图1中④过程采用了细胞核移植技术；来自同一个胚胎的后代具有相同的遗传物质，在胚胎移植时，可通过胚胎分割技术获得更多的胚胎．
（4）已知质粒pZHZ1的长度为3.7kb，其中BC区域长度为0.2kb，所以切去BC段后的质粒长度为3.7-0.2=3.5kb．现用限制酶A、D切割重组质粒pZHZ2样品，结果被酶A切割成1.7kb和3.4kb两个片段，可知重组质粒pZHZ2的总长度为1.7+3.4=5.1kb，所以KIFⅡ基因长度为5.1-3.5=1.6kb．重组质粒中A的切割位点距B的切割位点0.8kb，单独用限制酶A切割后产生1.7kb和3.4kb两个片段，说明在重组质粒中除了图中标示出来的A酶识别位点外，还有一个A酶识别位点；D酶的酶切位点距C0.5kb，用D单独酶切后产生1.9kb和3.2kb两个片段，说明在重组质粒中含有一个D的酶切位点，根据题中信息提示“目的基因内部的酶D切割位点用相应的字母（D）标注在图3中”，可确定在BC之间含有D的一个识别位点，D的识别位点在距B右侧0.2kb处，距A右侧1.0kb处，如下图所示：．
故答案为：
（1）启动子　       　
（2）促性腺　       减数第二次分裂中期
（3）细胞核移植　   胚胎分割
（4）1.6 kb  

点评 本题结合转基因山羊培育过程图，考查基因工程、细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记所列知识要点，能准确判断图中各过程的名称，并能在较简单的情境中使用，属于考纲识记层次的考查．