请回答下列有关基因工程的问题．下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点．图1是转基因香蕉的培育过程.含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点．限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaI识别序列及切割位点(1)从转基因香蕉培育用质粒作为运载体.基因工程中还可以用噬菌体或动植物病毒作为运载体．(2)图中的质粒和目的基因构建重组质� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

10．请回答下列有关基因工程的问题．
下表是基因工程中几种限制酶识别序列及其切割位点．图1是转基因香蕉的培育过程，含目的基因的外源DNA和质粒上的箭头表示相关限制酶的酶切位点．

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaI
识别序列及切割位点

（1）从转基因香蕉培育用质粒作为运载体，基因工程中还可以用噬菌体或动植物病毒作为运载体．
（2）图中的质粒和目的基因构建重组质粒，不能使用SmaI酶切割，原因是SmaI酶会破坏目的基因和质粒
（3）图2是用BamHⅠ和HindⅢ（限制）酶进行切割得到的目的基因．可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．

（4）人体细胞内含有抑制癌症发生的某基因，生物技术可对此类基因的变化进行检测．该基因含有800对碱基对（bp），用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp，．用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，50bp，200bp．而患者体内获取的这段基因，用BamHⅠ切割得到的区段变为400bp，400bp，用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，250bp．在正常人体内BamHⅠ和EcoRⅠ识别序列分别有2个和2个，患者体内发生了基因突变．

分析根据题意和图示分析可知：含目的基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ、EcoRⅠ酶切位点，但SmaI酶切位点位于目的基因和标记基因上，切割会破坏目的基因，EcoRⅠ酶切割质粒自身环化，用BamHI 和HindⅢ酶对外源DNA和质粒进行切割．图中①是构建基因表达载体；②③是利用农杆菌转化法将目的基因导入受体细胞；④和⑤表示植物组织培养，原理是香蕉组织细胞具有全能性，其中④表示脱分化，⑤表示再分化，培养皿中的培养基除添加营养物质外，还需要添加生长素和细胞分裂素．

解答解：（1）质粒作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来．基因工程中还可以用病毒（噬菌体或动植物病毒）作为运载体．
（3）SmaI酶会破坏目的基因和质粒的标记基因（抗性基因），因此图中构建重组质粒时不能使用SmaI酶切割．
（3）根据图中DNA片段两侧的黏性末端可知，左侧是用限制酶BamHI切割形成的，右侧是用限制酶HindⅢ切割形成的，这样可以防止含目的基因的外源DNA片段切割后自身环化．
（4）该基因用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp三种长度的DNA片段，说明在正常人体内BamHⅠ的识别序列有2个；用BamHⅠ切割得到的400bp，200bp，200bp后，再用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，50bp，200bp，说明400bp被切割成100bp，300bp，其中一个200bp被切割成150bp，50bp，可见EcoRⅠ识别序列也有2个．患者体内获取的这段基因，用BamHⅠ切割得到的区段变为400bp，400bp，用EcoRⅠ再次切割得到100bp，300bp，150bp，250bp，说明有一个BamHⅠ识别序列发生了基因突变，不能被BamHⅠ切割．
故答案为：
（1）噬菌体或动植物病毒
（2）SmaI酶会破坏目的基因和质粒
（3）BamHⅠ和HindⅢ
（4）2 2 基因突变

点评本题结合图表，考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具、操作步骤及相关细节；识记植物组织培养的过程及条件，能正确分析题图，再结合所学的知识准确答题．

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（2）根据上述摘要，转基因操作时所用的载体是农杆菌的Ti质粒，载体上的T-DNA可以转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．构建的基因表达载体中含有：①②③⑤⑧（从下列选项中选择）．
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