[题目]枯草杆菌广泛分布于土壤及腐败的有机物中.某工厂为生产耐高温的淀粉酶.开展了枯草杆菌菌株的筛选.酶的固定化分析研究.其流程如图所示:(1)配制培养基:该培养基应以为唯一碳源.(2)取土样加入盛有无菌水的三角瓶中.常压加热至水沸腾后维持20分钟.其目的是 .取出三角瓶置于37℃培养24小时.液面产生黄白色皮膜.用接种环挑取菌膜.用 � 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

【题目】枯草杆菌广泛分布于土壤及腐败的有机物中，某工厂为生产耐高温的淀粉酶，开展了枯草杆菌菌株的筛选、酶的固定化分析研究，其流程如图所示：

（1）配制培养基：该培养基应以______为唯一碳源。

（2）取土样加入盛有无菌水的三角瓶中，常压加热至水沸腾后维持20分钟，其目的是______，取出三角瓶置于37℃培养24小时，液面产生黄白色皮膜，用接种环挑取菌膜，用______法接种到平板上，于37℃恒温箱中培养24小时，取出观察，若淀粉被水解，菌落周围会产生______，选择优良的菌株进行扩大培养。

（3）在建立和优化淀粉酶固定化酶柱连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的______（答出2点即可）、反应pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过______来调节。

（4）固定化酶柱在使用后，需用______洗涤，放置于4℃冰箱中。

【答案】淀粉筛选出耐高温菌株划线分离透明圈固定化酶的量、反应液温度控制反应器液体流速 10倍柱体积的蒸馏水

【解析】

微生物的筛选与分离需要使用选择培养基。常用的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。固定化酶和固定化细胞的方法主要有包埋法、物理吸附法和化学结合法。影响酶的活性的因素主要有温度和pH等。

（1）为生产耐高温的淀粉酶，该培养基应以淀粉为唯一碳源。

（2）取土样加入盛有无菌水的三角瓶中，常压加热至水沸腾后维持20分钟，其目的是筛选出耐高温菌株，取出三角瓶置于37℃培养24小时，液面产生黄白色皮膜，用接种环挑取菌膜，用平板划线法接种到平板上，于37℃恒温箱中培养24小时，取出观察，若淀粉被水解，菌落周围会产生透明圈，选择优良的菌株进行扩大培养。

（3）在建立和优化淀粉酶固定化酶柱连续生产工艺研究中，通常要分析汁液中各种成分的浓度和所用酶的活性，然后主要优化各固定化酶反应器中的固定化酶的量、反应液温度、反应pH和酶反应时间等因素。其中，酶反应时间可通过控制反应器液体流速来调节。

（4）固定化酶柱在使用后，需用10倍柱体积的蒸馏水洗涤，放置于4℃冰箱中

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（2）经过稀释，在平板上接入0.1mL稀释液并涂布，经适当时间培养后，在平板上计数菌落，据此可计算出每毫升培养液中的活菌数。这种计数方法得到的结果一般比实际值偏小，原因可能是___________。

（3）经上述实验得到如下表所示的结果，为保证结果准确，一般选择___________稀释倍数的平板进行统计。有同学认为稀释操作时，可以将1mL培养液加适量无菌水直接稀释至上述稀释倍数，这样可以简化步骤，省去梯度稀释的麻烦。该方法___________(填“合理”或“不合理”)，因为___________。

（4）如果脂肪酶的产业化需要其活性在固定化处理时不受损失，且在多次重复使用后仍能维持稳定的酶活性，则应选择下表中的___________法固定化工艺。使用分泌脂肪酶细菌与固定化脂肪酶进行生产，都需要适宜的___________(填序号)。

①温度 ②水 ③营养 ④pH

酶固定化方法	吸附法	共介结合法	包埋法
制备难易	易	难	难
酶活力损失	小	大	小
酶与载体的结合能力	较弱	强	强
成本	低	高	中
对底物和产物的要求	无特殊要求	无特殊要求	分子量需比较小

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材料和用具：头部挂在铁支架上、在左后肢大腿背面暴露出坐骨神经的“脊蛙”一只，小烧杯，1%的硫酸溶液，清水，剪刀，药用棉等。

（要求与说明：实验过程中只能选择后肢趾部为刺激点，1%的硫酸溶液为刺激物，对坐骨神经的有关处理只能在左大腿背面已暴露的坐骨神经处进行。）

①用1%的硫酸溶液刺激“脊蛙”左侧后肢趾部，两侧后肢都会出现屈腿反射；用1%的硫酸溶液刺激“脊蛙”右侧后肢趾部，两侧后肢都会出现屈腿反射；

②用清水清洗刺激部位。

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