Question

【题目】回答有关基因工程的问题。

（1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生_________末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生______________(填“相同”或“不同”)黏性末端的限制酶。

（2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是______________。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用______________处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为______________。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成______________，常用______________技术。

（3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的______________中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的______________上。

（4）人的基因在细菌体内能表达，说明人和细菌____________________________。

Answer 1

【答案】平 相同 提供RNA聚合酶特异性识别结合位点，驱动基因转录出mRNA Ca2+(CaCl2溶液) 分子杂交技术 蛋白质(成人胰岛素) 抗原—抗体杂交 T—DNA 染色体 共用一套密码子

【解析】

基因工程操作的工具是限制性内切酶、DNA连接酶和运载体；基因工程操作的步骤为提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与表达。目的基因的检测有多种手段，如①DNA分子杂交技术；②分子杂交技术；③抗原-抗体杂交技术。

（1）用限制酶切割DNA后，可能产生黏性末端，也可能产生平口末端．若要在限制酶基因工程中，往往采用同种限制酶切割目的基因和质粒以产生相同的黏性末端，再用DNA连接酶使其直接进行连接。

（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质；将目的基因导入微生物细胞时，常用Ca2+处理微生物细胞，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态细胞，以利于表达载体进入；为了检测目的基因是否转录出了mRNA，可采用分子杂交技术，即用放射性同位素标记的胰岛素基因作探针与mRNA杂交；了检测目的基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，可采抗原--抗体杂交技术。

（3）采用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞时，先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的T-DNA中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的染色体上。

（4）人的基因在细菌体内能表达，说明人和细菌共用一套密码子。