Question

科研人员想研究“在胰岛素使用总量不变的前提下，胰岛素使用次数对同一组织不同细胞株克隆效率的影响”．请完成实验思路，并分析实验结果．
实验材料：M浓度胰岛素溶液（小鼠血浆昼夜平均胰岛素浓度）、培养液、小鼠皮肤生发层组织（能增殖）、胰蛋白酶、3种抗体、生理盐水等．（要求与说明：答题时不考虑加入胰岛素溶液后的培养液体积变化等误差；不同浓度的胰岛素溶液加入细胞培养液的间隔时间为24小时；抗体能识别特定的膜蛋白质，但不损伤细胞）
（1）实验思路：
①向有小鼠皮肤生发层组织的培养液中加入

 

获得单细胞悬浮液，再转入特殊培养液中进行原代培养，然后将其分成3瓶，并在每瓶中加入

 

从而获取3种特殊细胞，分别命名为细胞株1、2、3．
②将M浓度胰岛素溶液分别稀释到原浓度的

1

2

、

1

3

，备用．
③实验分组及操作．若实验在适宜条件下进行72小时，以细胞株1为例，将细胞株1均分为3份实验，请完成表格．

细胞株类型	胰岛素浓度	加入胰岛素次数	检测内容
细胞株1

（2）实验分析：
①本实验用克隆化细胞株而不是原代培养物作实验材料，原因是克隆化细胞株中的细胞具有

 

 的特点，这样可以减少实验误差．
②按照上述实验操作，可能还会产生一定的误差，改进的办法是

 

．

Answer 1

考点：动物细胞与组织培养过程

专题：

分析：实验的目的是为了研究在胰岛素使用总量不变的前提下，胰岛素使用次数对同一组织不同细胞株克隆效率的影响．根据实验的对照原则和单一变量原则，将M浓度胰岛素溶液分别稀释到原浓度的

1

2

、

1

3

，则胰岛素浓度为M，加1次胰岛素；胰岛素浓度为

M

2

，分2次加胰岛素；胰岛素浓度为

M

3

，分3次加胰岛素．克隆化细胞株中的细胞具有遗传物质均一，表现性状相似的特点，这样可以减少实验误差．重复实验，求平均值，可以减少实验偶然因素引起的误差．

解答： 解：（1）①肿瘤组织的细胞之间有一些蛋白质类物质，根据酶的专一性，培养之前，肿瘤组织必须先用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）等处理成单个细胞．获得单细胞悬浮液后，再转入特殊培养液中进行原代培养，然后将其分成3瓶，并在每瓶中加入一种抗体从而获取3种特殊细胞，分别命名为细胞株1、2、3．③实验的目的是为了研究在胰岛素使用总量不变的前提下，胰岛素使用次数对同一组织不同细胞株克隆效率的影响．因此胰岛素浓度为M，加1次胰岛素；胰岛素浓度为

M

2

，分2次加胰岛素；胰岛素浓度为

M

3

，分3次加胰岛素．培养30小时后，检测每培养瓶中的细胞数量．
（2）①克隆化细胞株中的细胞具有遗传物质均一，表现性状相似（或同质性/生理特征相同）的特点，这样可以减少实验误差．因此本实验用克隆化细胞株而不是原代培养物作实验材料．
②上述实验操作中，还可以改进的办法是每个实验组再增加若干个样品（或重复上述实验步骤若干次），求平均细胞总数，减少实验偶然因素引起的误差．
故答案为：
（1）①胰蛋白酶         一种抗体
③

（2）①遗传物质均一，表现性状相似（或同质性/生理特征相同）
②每个实验组再增加若干个样品（或重复上述实验步骤若干次），求平均细胞总数

点评：本题考查动物细胞培养过程及应用、探究实验，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，并能对实验现象和结果进行解释、分析和处理．