Question

【题目】嗜热土壤芽孢杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，利用大肠杆菌表达BglB酶，开展了以下试验。（图中启动子与RNA聚合酶结合，终止子是给予RNA聚合酶转录终止信号的DNA序列）

（1）______扩增bglB基因时，选用嗜热土壤芽孢杆菌基因组DNA作模板。

（2）如图为质粒限制性核酸内切酶切图谱，为使获得的bglB基因与质粒载体连接，bglB基因两端需分别含有______和______不同限制酶的识别序列

（3）将重组DNA分子导入受体细胞，为了促进该过程，应该用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是______。

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为______。

（5）下列有关限制性核酸内切酶的叙述中正确的是______

A．用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有2个

B．限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大

C．-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数不同

D．只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒

Answer 1

【答案】PCR NdeⅠ BamHⅠ 增加大肠杆菌细胞壁的通透性 转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 B

【解析】

基因工程的一般步骤：提取目的基因；目的基因与运载体结合；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和表达。

（1）PCR技术可在体外大量扩增目的基因。

（2）图中质粒上有多个限制性核酸内切酶的切割位点，但用PstⅠ切割会破坏抗生素抗性基因（标记基因），用KpnⅠ切割会破坏复制原点，用XbaⅠ切割会去除终止子，用EcoRⅠ切割会破坏终止子，用HindⅠ切割会破坏启动子，为使获得的bglB基因与质粒载体连接，为了防止目的基因和运载体自身环化，应该用两种限制酶切割，则bglB基因两端需分别含有NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的识别序列。

（3）将重组DNA分子导入受体细胞，为了促进该过程，应该用氯化钙处理大肠杆菌，其目的是增加大肠杆菌细胞壁的通透性，是大肠杆菌处于感受态。

（4）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶。

（5）A、用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有4个，A错误；

B、限制性核酸内切酶识别的序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大，B正确；

C、-CATG↓-和一G↓GATCC--序列被限制性核酸内切酶切出的粘性末端碱基数相同，都是4个，C错误；

D、用不同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，也能形成重组质粒，D错误