Question

【题目】几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，自然界有些植物能产生几丁质酶催化几丁质水解从而抵抗真菌感染。通过基因工程将几丁质酶基因转入没有抗性的植物体内，可增强其抗真菌的能力。下图表示为获取几丁质酶基因而建立cDNA文库的过程。

（1）图示以mRNA为材料通过_____________法获得cDNA，该方法依据的原理是_____________，通过这种方法获得的基因中缺乏_____________和_____________结构，导致将其直接导入受体细胞中不能复制和表达。

（2）与选用老叶相比，选用嫩叶更易提取到mRNA，原因是_______，且提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是_____________。

（3）将从cDNA文库中获得的几丁质酶基因和质粒载体用_____________酶和DNA连接酶处理后连接起来，构建基因表达载体，DNA连接酶催化形成的化学键是_____________。

Answer 1

【答案】反（逆）转录法 碱基互补配对 复制原点 启动子 嫩叶组织细胞易破碎 防止RNA降解 限制（酶） 磷酸二酯键

【解析】

基因工程的操作步骤：获取目的基因；构建基因表达载体；把目的基因导入受体细胞；目的基因的检测和鉴定。

（1）构建cDNA文库时，以mRNA通过反转录法依据碱基互补配对原理合成DNA，通过反转录合成的基因中无启动子、终止子、复制原点等结构，导致将其直接导入受体细胞中不能复制和表达。

（2）嫩叶组织细胞易破碎，更易提取到mRNA，且提取RNA时，需添加RNA酶抑制剂可以防止RNA降解。

（3）构建基因表达载体时，需要用限制酶和DNA连接酶进行处理，限制酶破坏磷酸二酯键，DNA连接酶催化磷酸二酯键形成。