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    【题目】请回答下列内容：

    （1）氨基酸序列分析技术和DNA序列分析的方法，为基因序列图的绘制提供了可能。DNA合成仪的问世为___________、探针、小分子量DNA基因的获得提供了方便。

    （2）研究人员用大肠杆菌作生产菌，利用基因工程技术分别生产胰岛素两条链。由A、B两条肽链可推导出A、B基因的碱基序列，依据是______________________。因为A、B基因中的脱氧核苷酸数量较少，常用___________方法获取目的基因。

    （3）目的基因扩增通常采用PCR技术，一个DNA在第三次扩增需引物对数为___________。

    （4）检测A、B基因是否导入受体细胞时，常用___________作探针。检测胰岛素基因是否表达常用___________杂交方法。

    （5）引导肽是由引导肽基因控制合成的一段多肽序列，若在胰岛素的A、B肽链的前端加上引导肽序列后，可将A、B肽链引导到大肠杆菌的细胞膜外，便于A、B肽链提取。为实现上述目的，操作是______________________。在以后的体外加工过程中，需要用___________切除引导肽。

    【答案】引物??? 氨基酸和密码子的对应关系和碱基互补配对原则??? 人工合成??? 4??? 放射性标记的A、B基因的一条单链??? 抗原—抗体??? 将A、B基因连接在引导肽基因后??? 肽酶???

    【解析】

    基因工程技术的基本步骤：

    （1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

    （2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

    （3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

    （4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

    （1）DNA合成仪可以用于体外DNA分子小的片段的合成，因此为小分子量的DNA的合成、PCR扩增中引物的合成以及基因工程中基因探针的制作提供了方便。

    （2）根据胰岛素两条链上的氨基酸序列，利用氨基酸与密码子的对应关系可以推导出mRNA上的核苷酸序列，进而根据碱基互补配对的关系推导出合成胰岛素A、B两条肽链的A、B基因的碱基序列。因为A、B基因中的脱氧核苷酸数量较少，常用人工合成法合成目的基因。

    （3）一个DNA复制两次得到4个DNA分子，在第三次扩增时需引物对数为4对。

    （4）检测A、B基因是否导入受体细胞时，常用同位素标记的目的基因的单链作为探针（放射性标记的A、B基因的一条单链），与从受体细胞内取出的核DNA分子的单链进行杂交，观察有无杂交带的出现。检测胰岛素基因是否表达出胰岛素时，常用抗原-抗体杂交法判断。

    （5）根据题意，在胰岛素的A、B肽链的前端加上引导肽序列后，可将A、B肽链引导到大肠杆菌的细胞膜外，便于A、B肽链提取，为了达到这一目的可以将将A、B基因连接在引导肽基因后构建成基因表达载体，导入大肠杆菌细胞内。该胰岛素分泌后还需要切除引导肽序列，因此根据酶的专一性，需要用肽酶切除引导肽。

    练习册系列答案
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    微生物名称

    菌落数

    构成比(%)

    金黄色葡:萄球菌

    126

    29.50

    表皮葡萄球菌

    67

    15.96

    四联球菌

    8

    1.87

    八叠球菌

    64

    14.99

    大肠埃希氏菌

    54

    12.65

    枯草杆菌

    15

    3.51

    变形杆菌

    11

    2.58

    铜绿假单胞菌

    4

    0.94

    X

    78

    18.27

    ?

    （1）微生物培养通常使用____（填“牛肉膏蛋白胨”或“MS”）培养基，制备该培养基的步骤是计算、___ 、熔化、灭菌和倒平板。表格中X可能是____，它与表格中其他微生物的结构的主要区别是____。

    （2）将金黄色葡萄球菌纯化后，接种到液体培养基培养，然后取ImL该液体培养基稀释10000倍，在3个平板分别接种0．lmL稀释液。适宜条件下培养，3个平板上的菌落数分别为39、38和37，则5mL液体培养基中金黄色葡萄球菌约____个。

    （3）胡萝卜素对保护视力有重要作用，日常生活中人们烹饪胡萝卜时要适当多放点油，原因是____。从胡萝l中萃取胡萝l素的生产过程中，为提高萃取效率，萃取前要将胡萝卜进行____。

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    B. 人的一个次级精母细胞中有0或1或2条X染色体

    C. 次级精母细胞中染色体的数目等于神经细胞中的染色体数

    D. 初级精母细胞核中的DNA分子和神经细胞核中的DNA分子数目相同

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    A.胡克发现并命名了活细胞

    B.证明了生物之间有亲缘关系

    C.施莱登提出“所有的植物是由细胞组成的，细胞是植物各种功能的基础”

    D.发现了动植物细胞的不同之处

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    生长素类似物浓度（mg/l）

    0

    a

    b

    一定时间后根的总长度

    3.9

    c

    3.7

    ?

    ?

    A.4.8?B.3.8?C.3.9?D.3.5

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