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    9．如表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点．
    限制酶MseⅠPstⅠEcoRⅠSmaⅠXmaⅠ
    识别序列及切割位点

    （1）限制酶SmaⅠ和XmaⅠ作用的不同点是切割位点不同．
    （2）图2中的目的基因D需要使用MetⅠ和PstⅠ剪切才能获得，因而需要对图1所示的运载体进行改造，构建新的限制酶酶切位点，试帮助完成构建过程（填括号中物质的序号）：首先用①处理质粒；然后用⑤处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用④处理质粒，形成相应的限制酶酶切割位点，它可被②识别．（构建需要的所有条件如下：①EcoRⅠ②MseⅠ③PstⅠ④DNA连接酶⑤DNA聚合酶）
    （3）检测筛选是一个重要步骤，图3表示在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种方法与培养方法，以检测基因表达载体是否导入大肠杆菌，培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素和青霉素．从筛选结果分析，含目的基因的是4、6（填图中编号）菌落中的细菌．

    分析 分析表格：限制酶Sma I的识别序列是CCCGGG，在C和G之间切割；限制酶Xma I的识别序列是CCCGGG，在第一个C和第二个C之间切割．
    分析图1、图2：质粒只有EcoR I酶和Pst I酶的识别位点，外源DNA分子含有Mse I酶、EcoR I酶和Pst I酶识别位点，且切割获得目的基因需要Mse I酶和Pst I酶．
    分析图3：质粒上含有两个抗性基因，即四环素抗性基因和青霉素抗性基因．对质粒进行改造时，已将青霉素抗性基因破坏，所以含重组质粒的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生存，但在含有青霉素的培养基上不能生存．

    解答 解：（1）分析表格可知，限制酶SmaⅠ和XmaⅠ作用的切割位点不同．
    （2）分析图解可知，图2中的目的基因D需要使用MetⅠ和PstⅠ剪切才能获得，因而需要对图1所示的运载体进行改造，对质粒改造使，需构建新的限制酶酶切位点．首先用①EcoRⅠ处理质粒；然后用⑤DNA聚合酶处理质粒，使被切开的质粒末端连接上相应的脱氧核苷酸；再用④DNA连接酶处理质粒，形成了的限制酶酶切割位点，这样它可被②MetⅠ识别．
    （3）由图可知，质粒上含有两个抗性基因，即四环素抗性基因和青霉素抗性基因．对质粒进行改造时，已将青霉素抗性基因破坏，所以含重组质粒的大肠杆菌能在含有四环素的培养基上生存，但在含有青霉素的培养基上不能生存．所以图中培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A和培养基B分别还含有四环素和青霉素，在含有四环素的培养基上能生存，在含有青霉素的培养基上不能生存的4和6菌落就是含有目的基因的菌落．
    故答案为：
    （1）切割位点不同
    （2）MetⅠ和PstⅠ①⑤④②
    （3）四环素    青霉素     4、6

    点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的操作工具及具体的操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合题干信息准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．

    练习册系列答案
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