Question

9．为了调查赣江的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作．回答下列问题：
（1）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是调整pH和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌．倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染．
（2）该小组可采用图②所示的稀释涂布平板法（方法）检测水样中的细菌含量．在接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37．据此可得出每升水样中的活菌数为3.8×10⁷．
（3）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌．操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个菌落．
（4）在纯化过程中，在固体培养基上划线分离过程中，正确的操作是D
A．每次划线时，接种环都需要蘸菌液一次
B．划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种
C．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
D．在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风．

Answer 1

分析 分析图解：图中细菌的分离的方法为①表示平板划线法，②表示稀释涂布平板法．
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落．
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落．

解答 解：（1）制备实验所需的培养基时，在各成分都溶化后和分装前，要进行的是调整pH和灭菌，对培养基进行灭菌的常用方法是高压蒸汽灭菌．倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染．
（2）该小组可采用图②所示的稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量．微生物培养过程应该进行无菌操作，配制的培养基要进行高压蒸汽灭菌，可以将灭菌后的空白平板进行培养以检测培养基灭菌是否彻底；由由题意知1ml水样中的菌落数是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×10⁴个，每升水样中的活菌数为3.8×10⁴×10³=3.8×10⁷．
（3）平板划线法操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线．这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个菌落．
（4）A、平板划线法中，接种环只需要蘸菌液一次，进行连续几次划线操作，A错误；
B、划线分离时，不能把接种环深入到培养基中进行接种，只能在培养基表面进行划线操作，B错误；
C、划线时要将最后一区的划线不能与第一区的划线相连，C错误；
D、在超净平台中进行接种时，不能关闭过滤风，D正确．
故答案为：
（1）调整pH      高压蒸汽灭菌      防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
（2）稀释涂布平板法检测培养基平板灭菌是否合格       3.8×10⁷
（3）将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落不连续单个菌落     
（4）D

点评 本题主要考查培养基的制作和微生物的接种方法，意在强化学生对实验室的微生物的培养的相关知识的理解与掌握．