Question

【题目】下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamH I	Hind Ⅲ	EcoR I	Sma I
识别序 列及切 割位点	ATCC CCTA	GCTT TTCG	ATTC CTTA	CCGG GGCC

（1）一个图l所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有个游离的磷酸基团。
（2）若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越。
（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是。
（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入酶。
（5）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了。

Answer 1

【答案】
（1）0、2
（2）高
（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因
（4）DNA连接
（5）鉴定和筛选含有目的基因的细胞
【解析】（1）由于质粒在切割前是一个环状DNA分子，因此上面没有游离的磷酸基团；当质粒被切割后形成了两个末端各有1个游离的磷酸基团，故共有2个游离的磷酸基团． （2）SmaⅠ酶切位点越多，表示G和C这一对碱基对所占的比例就超高，而G和C之间含有三个氢键，故其热稳定性超高．（3）质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图可知，标记基因和外源DNA目的基因中 均含有SmaI酶切位点，都可以被SmaI酶破环，故不能使用该酶剪切质粒和含有目的基因的DNA． （4）为了使目的基因和质粒之间的磷酸二脂键相连，需要用DNA连接酶相连接．（5）抗生素抗性基因是一种抗性基因，抗性基因是为了鉴别和筛选目的基因是否导入到受体细胞内．
【考点精析】本题主要考查了基因工程的原理及技术的相关知识点，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术才能正确解答此题．