请分析回答下列有关现代生物科技方面的问题:白细胞介素是一类淋巴因子．研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中.使其分泌出有活性的人白细胞介素．(1)目的基因获取:从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞.于37℃培养48h.提取细胞总RNA.生成cDNA．根据已知目的基因的核苷酸序列合成引物.通过PCR扩增获取目的基因.此时需要加� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

请分析回答下列有关现代生物科技方面的问题：
白细胞介素是一类淋巴因子．研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中，使其分泌出有活性的人白细胞介素．
（1）目的基因获取：从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞，于37℃培养48h，提取细胞总RNA，生成cDNA．根据已知目的基因的核苷酸序列合成引物，通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是

．
重组载体的构建：用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，用

酶处理，形成重组载体．
将重组载体导入酵母细胞，在培养液中培养一段时间后，收集菌液离心取

（上清液/菌体）进行产物鉴定．
（2）如果要想要使牛奶中含有人白细胞介素，导入目的基因时常采用的方法是

．

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：分析题图：图示表示基因表达载体的构建过程，载体和目的基因都有限制酶EcoRⅠ与EcoR52的切割位点，所以切割载体和目的基因时用限制酶EcoRⅠ与EcoR52，再用DNA连接酶连接目的基因和运载体形成重组载体．

解答： 解：（1）以RNA为模板合成cDNA称为逆转录（反转录），该过程需要模板（RNA）、酶（逆转录酶和DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）和能量．采用PCR技术扩增获取目的基因时需要模板（cDNA）、酶（热稳定DNA聚合酶）、原料（脱氧核苷酸）、引物．因此，根据已知目的基因的核苷酸序列，合成引物、通过PCR扩增获取目的基因，此时需要加入的反应物与生成cDNA时所加反应物不同的是：模板cDNA、耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物．构建基因表达载体时，需先用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后，再用DNA连接酶处理，形成重组载体．将导入重组载体的酵母细胞培养一段时间后，收集菌液进行离心，应取上清液进行产物鉴定（白细胞介素属于分泌蛋白）．
（2）将目的基因导入动物细胞时常采用显微注射法．
故答案为：
（1）模板cDNA、耐高温（热稳定）DNA聚合酶（Taq酶）、引物 DNA连接上清液
（2）显微注射法

点评：本题结合图解，综合考查基因工程、PCR技术等知识，要求考生识记记基因工程的工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节；识记PCR技术的原理、条件，能与逆转录法进行比较，再结合所学的知识准确答题．

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