Question

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得．流程如下：

（1）htPA基因与载体用

 

切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用

 

技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其

 

．采集的精子需要经过

 

，才具备受精能力．
（3）采用

 

将重组表达载体导入受精卵，然后将受精卵移入

 

中继续培养得到早期胚胎．
（4）为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行

 

．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的

 

．
（5）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到

 

，说明目的基因成功表达．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术,胚胎移植

专题：

分析：1、DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体．
2、目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
3、该基因工程需要对羊的性别进行选择，由于只有母羊能够分泌乳汁，因此选择母羊的胚胎进行移植．

解答： 解：（1）htPA基因与载体需要用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体．检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术．
（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵．采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力．
（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法．受精卵需移入（胚胎）发育培养液中继续培养得到早期胚胎．
（4）只有母羊能分泌乳汁，为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定，以选择母羊的胚胎进行移植．利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性．
（5）若在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达．
故答案为：
（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）    DNA分子杂交（或核酸探针）
（2）超数排卵     获能（处理）
（3）显微注射法   （胚胎）发育培养液   
（4）性别鉴定   全能性
（5）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

点评：本题考查了基因工程和胚胎工程的相关知识，要求考生能够识记基因工程的操作步骤，明确该基因工程中需要选择母羊进行胚胎移植；识记胚胎工程的相关技术及应用，能结合所学的知识准确答题，属于考纲中识记、理解层次的考查．