Question

【题目】微生物的分离、培养和计数是现代生物工程应用中的重要环节。图示为大肠杆菌分离和培养过程中部分操作示意图。请分析回答下列问题。

（1）实验过程中对培养皿和实验操作者的双手所采用的灭菌或消毒方法依次是______、_______。

（2）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是___________。

（3）图示是利用____________法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是____________。

（4）关于图示的操作方法和结果正确的是___________。

A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌

B．划线操作须在火焰上进行

C．在5区域中才可以得到所需菌落

D．在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌

（5）若要培养具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养基的基础上需要__________。

Answer 1

【答案】干热灭菌 化学消毒 将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生 平板划线 以免接种环温度太高，杀死菌种 D 添加高浓度蔗糖(葡萄糖)和调低pH（或高糖和酸性的筛选环境）

【解析】

无菌操作技术有消毒和灭菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化学药剂消毒法，灭菌有灼烧灭菌法（适用于接种工具）、干热灭菌法（适用于玻璃器皿和金属工具）、高压蒸汽灭菌法（适用于培养基及容器的灭菌）。题图中使用划线分离法和稀释涂布分离法分离大肠杆菌，利用平板划线法接种，需要注意的是接种环在划线时每次划线前要灼烧，冷却后从上一区划线末端开始划，划线首尾区不重叠；稀释涂布法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。

（1）实验过程中对培养皿和实验操作者的双手所采用的灭菌或消毒方法依次是干热灭菌、化学消毒。

（2）检测固体培养基是否被污染应采用的检测方法是将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。

（3）据图可知，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线，原因是以免接种环温度太高，杀死菌种。

（4）划线的顺序为12345，操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌，划线操作须在火焰旁进行，在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌，在5个区域中都有可能得到菌落，故D正确。

（5）若要培养具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制备选择培养基时在基本培养基的基础上需要添加高浓度蔗糖(葡萄糖)和调低pH（或高糖和酸性的筛选环境）。