Question

在土壤中存在多种自生固氮菌，它们对增加土壤中的氮素有重要意义．某实验小组试图从土壤中分离自生固氮菌，并制成菌肥施入土壤中增加土壤肥力．实验流程大致如图所示．

（1）图4中的培养基成分如下表：

C6H12O6	KH2PO4	MgSO4	NaCl	CaSO4	蒸馏水	琼脂	pH
10g	0.2g	0.2g	0.2g	5g	1000mL	10g	7.0

此培养基的特点是

 

，原因是

 

．
（2）从功能上看，此培养基属于

 

培养基．从形态上看，此培养基属于固体培养基，有利于

 

．
（3）因为琼脂中常含有氮，因此使用前需要用自来水流水冲洗几天，再用

 

浸泡，洗涤几次，以除去其中的氮．
（4）实验步骤3在超净台上，将接种环在

 

上灭菌冷却后，才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面，也可采用

 

法接种．接种后必须将培养皿

 

培养，以免冷凝水滴落．
（5）实验的培养时间不宜过长，否则

 

．
（6）小组成员用放射线处理分离得到的固氮菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如下表．

接种的菌种	一般培养基	实验处理及结果
A	不生长	添加营养物甲，能生长
B	不生长	添加营养物乙，能生长
A+B	能生长	不添加营养物甲、乙就能生长

①突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是

 

．
②将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中却能正常生长，那么最可能原因是

 

．

Answer 1

考点：微生物的分离和培养

专题：

分析：（1）培养基的营养构成：各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐．分为液体培养基和固体培养基．
（2）常用灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌法．
（3）培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌和消毒方法依次：高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学消毒、紫外线灭菌、巴氏消毒法．
（4）接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法．
（5）选择培养基的原理是：不同微生物在代谢过程中所需要的营养物质和环境不同．有的适于酸性环境，有的适于碱性环境；例如从土壤中分离放线菌时，可在培养基中加入10%的酚数滴，抑制细菌和真菌的生长；如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度的食盐．

解答： 解：（1）培养基的成分包括水、无机盐、碳源、氮源及生长因子，由表可知，该培养基中无氮源，故在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长．
（2）从功能上看，此培养基属于选择培养基，从形态上看，由于含有凝固剂琼脂，此培养基属于固体培养基，有利于菌种的分离纯化．
（3）因为琼脂中常含有氮，因此使用前需要用自来水流水冲洗几天，再用蒸馏水浸泡，洗涤几次，以除去其中的氮．
（4）接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法，接种环需在酒精灯火焰上灭菌冷却后，才能蘸取少许稀释液用点接法接种在培养基表面，也可采用平板划线法接种，接种后必须将培养皿倒置培养，以免冷凝水滴落，防止杂菌污染．
（5）培养时间过长可能导致菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长．
（6）根据题意突变株A在普通培养基中不生长，加营养物质甲可以生长，说明突变株A不能合成突变株A必需的营养物质甲，同理突变株B不能合成突变株B必需的营养物质乙，生物体内的生化反应都需要酶的参与，不能反应就说明缺少相应的酶；而将A+B就可以生长，说明A可以提供B所必需的营养物质乙，B可以提供A所必需的营养物质甲．
故答案为：
（1）缺乏氮源  在这种培养基上，其他类型的微生物不能生长，而自生固氮菌能利用空气中的氮气作为氮源进行生长
（2）选择    分离纯化  
（3）蒸馏水
（4）酒精灯火焰    划线  倒置  
（5）菌落会分泌含氮化合物，引起杂菌生长
（6）①自身不能合成物质甲    ②突变株A能合成物质乙，突变株B能合成物质甲，因此一起培养可以相互支持保证必需的营养要素

点评：本题的知识点是微生物的分离和培养，主要考查学生运用微生物的培养技术解决生活中问题的能力和对微生物，是实验室培养技术的综合应用能力．