Question

【题目】酵母菌生长的最适宜温度在20～30℃之间，能在pH为3～7.5的范围内生长，在氧气充足的环境中主要以出芽生殖的方式快速增殖。大约每1.5～2小时增殖一代。某研究性学习小组据此探究酵母菌种群在不同的培养液浓度和温度条件下种群密度的动态变化，进行了如下实验，实验操作步骤如下：

第一步：配制无菌马铃薯葡萄糖培养液和活化酵母菌液。

第二步：利用相同多套装置，在适宜条件下培养。

第三步：用血球计数板计数装置中起始酵母菌数目，做好记录。

第四步：将各装置放在其他条件相同且适宜的条件下培养。

第五步：连续7天，每天随机抽时间取样计数，做好记录。

回答下列问题：

（1）改正实验操作步骤中的一处错误：_____________________________________。

（2）某同学第5天在使用血球计数板计数时做法如下：

①摇匀试管，取1mL培养液并稀释10倍（稀释样液的无菌水中加入了几滴台盼蓝染液）。

②先将__________放在计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸吸去，制作好临时装片。

③显微镜下观察计数：在观察计数时只记______（填“被”或“不被”）染成蓝色的酵母菌。

（3）若在显微镜下观察计数某一小方格时，活菌分布如下图所示，则记录的数目是___________个。若平均每个样方中的酵母菌数目就是该数目，所使用的血球计数板有16个中方格，每1中方格中有25个小方格，每1个大方格容积为0.1mm3（1mL=1 000mm3）。则酵母菌细胞个数/mL=___________________。

（4）在实验过程中，培养液的pH值变化为______________。

（5）实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，正确的方法是________________________。

Answer 1

【答案】第五步中应每天同一时间取样 盖玻片 不被 8 3.2×108 逐渐变小 浸泡和冲洗

【解析】

1、探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化实验的原理：

（1）在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

（2）养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素，细菌在一定体积培养液中的增长如图所示：

。

2、通过建立反映种群动态变化的数学模型，分别说明种群个体数量的增长规律以及种群外部环境因素和种群内部因素对种群个体数量的制约．
血球计数板有16个中方格，每l中方格中有25个小方格，即总共有16×25=400个小方格。计数室的容积为0.1mm3（1mL=1000mm3），每个小方格的体积为mm3，；酵母细胞个数/1mL=平均每个小方格的酵母菌数÷每1个小方格容积×稀释倍数=平均每个小方格的酵母菌数×400×104×稀释倍数。

（1）第五步中“每天随机抽时间取样计数”应改为“每天同一时间（定时）取样”，这样每天取样时间间隔相同，是所得的实验数据更加准确，画出的变化曲线更加具有参考价值。

（2）②在对酵母菌数量进行抽样检测时，首先振荡摇匀试管，取1mL培养液并适当稀释，然后将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘，让培养液自行渗入，多余培养液用滤纸（吸水纸）吸去，制作好临时装片。

③在显微镜下观察计数时，由于死的酵母菌细胞膜失去选择透过性，所以被染成蓝色，而活的酵母菌不会被染色，因此计数时只记不被染成蓝色的酵母菌。

（3）已知所使用的血球计数板有16个中方格，每l中方格中有25个小方格，每1个小方格容积为0.1mm3（1mL=1000mm3）。据图分析可知每个小方格平均有8个酵母菌，则1mL培养液中酵母细胞个数=平均每个小方格的酵母菌数÷每1个小方格容积×稀释倍数=平均每个小方格的酵母菌数×400×104×稀释倍数=8×400×104×10=3.2×108。

（4）在实验过程中，由于酵母菌呼吸产生二氧化碳，所以培养液的pH值会逐渐变小。

（5）实验结束后，血球计数板应该进行浸泡和冲洗，而不能用试管刷蘸洗涤剂擦洗。