Question

14．番茄果实中含丰富的番茄红素，对人体防治肿瘤、心血管疾病以及延缓衰老具有一定作用．
（1）科学家为构建高产番茄红素的酵母细胞应用了转基因技术，其核心步骤是构建基因表达载体（目的基因与运载体结合）．如图所示其部分模式图，位点1、2、3、4对应的限制酶分别是PacⅠ、SexAⅠ、AscⅠ、PmeⅠ则获取目的基因使用的限制酶是SexAⅠ和AscⅠ；PacⅠ能否切割位点2？为什么不能，因为限制酶具有特异性．
（2）为确定目的基因已导入番茄细胞中，常用DNA分子杂交技术进行检测，最后再进行个体水平的鉴定．
（3）科学家运用植物体细胞杂交技术培育出了“番茄一马铃薯”杂种植株，但并没有获得预期的性状，主要原因是基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的．
（4）转基因技术和植物体细胞杂交技术在育种上具有的共同意义是能克服物种间远缘杂交不亲和的障碍．

Answer 1

分析 1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．
2、植物体细胞杂交的意义：克服物种间远缘杂交不亲和的障碍．
3、分析题图：图示为基因表达载体的构建过程，经过该过程，目的基因位于位点2和位点3之间，说明获取目的基因使用的限制酶是切割位点2和位点3的酶．

解答 解：（1）基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建；位点1、2、3、4对应的限制酶分别是PacⅠ、SexAⅠ、AscⅠ、PmeⅠ，图中目的基因位于位点2和位点3之间，则获取目的基因使用的限制酶是SexAⅠ和AscⅠ；由于限制酶具有特异性，因此PacⅠ不能否切割位点2．
（2）检测目的基因是否导入受体细胞，常用DNA分子杂交技术进行检测，最后再进行个体水平的鉴定．
（3）培育“番茄一马铃薯”杂种植株采用了了植物体细胞杂交技术，但并没有获得预期的性状，主要原因是基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的．
（4）转基因技术和植物体细胞杂交技术在育种上具有的共同意义是：能克服物种间远缘杂交不亲和的障碍．
故答案为：
（1）构建基因表达载体（目的基因与运载体结合）    SexAⅠ和AscⅠ不能，因为限制酶具有特异性
（2）DNA分子杂交
（3）植物体细胞杂交  基因的表达不是孤立的，是相互调控、相互影响的
（4）能克服物种间远缘杂交不亲和的障碍

点评 本题考查基因工程和植物体细胞杂交的相关知识，要求考生识记基因工程的操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；识记植物体细胞杂交的过程及意义，能结合所学的知识准确答题．