Question

I．逆转录病毒载体是一种表达型质粒，结构如图1所示．图上的“逆转录病毒序列”可以整合到动物细胞的染色体上，不断地表达其携带的目的基因．（E、F、H分别为限制酶E、F、H的酶切位点）．
（1）逆转录的模板是

 

，原料是

 

．
（2）在构建重组质粒时，目的基因应插入到该质粒的位置是

 

，此过程需使用的酶是

 

．为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加

 

的培养基进行培养．获取大量重组质粒后，将其再转入到某种哺乳动物细胞中，可获得大量重组逆转录病毒．
Ⅱ．图2为培育转基因小鼠基本过程的示意图．请回答下列问题：
（3）如A为重组质粒溶液，将其导人原核期受精卵的方法是

 

；如A为重组逆转录病毒，还可采取

 

方法．
（4）小鼠出生后可从其尾巴提取

 

分子，通过

 

方法，可检测出携带目的基因的小鼠．
（5）若目的基因进入细胞后插入在一条染色体DNA上，那么获得转基因纯合子小鼠的方法是

 

．

Answer 1

考点：基因工程的原理及技术

专题：

分析：据图分析，基因表达载体的构建是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，基因工程载体的条件是能在受体细胞中保存并大量复制、有一至多了限制性内切酶切点和有特殊的遗传标记基因，便于进行筛选．逆转录酶序列中有限制酶F的切割位点，目的基因与运载体结合，在粘性末端碱基互补配对，需要DNA连接酶作用于磷酸二酯键，形成重组DNA分子；该质粒上有具有的遗传标记基因是抗生素A抗性基因，可以用加有抗生素A的选择培养基进行筛选；目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，动物细胞可以让转基因雌雄小鼠间相互交配，逐代筛选．

解答： 解：（1）逆转录是以RNA为模板合成DNA的过程，所需要的模板为RNA，原料为四种脱氧核苷酸．
（2）基因工程需要工具酶是限制酶和DNA连接酶；用到的限制酶不能破坏标记基因（抗生素A抗性基因），且应该整合到“逆转录病毒序列”上；抗生素A抗性基因为标记基因，用来帮助筛选目的基因．
（3）用显微注射技术将重组质粒溶液导人受精卵；如A为重组逆转录病毒，还可采取感染方法．
（4）小鼠出生后可从其尾巴提取DNA分子，通过DNA分子杂交方法，可检测出携带目的基因的小鼠．
（5）目的基因进人细胞后插入在一条染色体DNA上，对应的同源染色体上无对应的等位基因；让转基因小鼠相互交配，就能获得转基因纯合子小鼠．
故答案为：I（1）RNA     （四种）脱氧核苷酸
（2）F（逆转录病毒序列）     限制酶和DNA连接酶（缺一不得分）  抗生素
II（3）显微注射（法）      感染（侵染）
（4）DNA    DNA分子杂交（或核酸分子杂交）
（5）转基因小鼠间相互交配（或杂交）

点评：本题考查RNA复制，逆转录需要的模板、原料，重组质粒时目的基因的插入位点，DNA分子杂交技术的知识，意在考查学生识图能力、信息的提取与应用能力、通过比较与综合做出合理判断的能力等．