Question

16．请分析回答有关微生物及其应用的问题：
Ⅰ、柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗．科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如图1）．

（1）欲分离筛选出能分泌脂肪酶的微生物M，应选择下列固体培养基（仅列出了碳氮源）中的B．（填编号）
A．蛋白胨、柠檬酸铁铵    B．橄榄油、硫酸铵    C．乳糖、酵母膏    D．葡萄糖、蛋白胨
（2）微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测酶活性来确定其应用价值．为降低生物柴油生产成本，可利用酶的固定化技术使脂肪酶能够重复使用，比较图2中的三种工艺，最好选择C 工艺．
Ⅱ、苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物．研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图3所示，①为土壤样品．
（3）④为对照，微生物在④中不生长、在⑤中生长．④与⑤培养基的主要区别在于④的培养基中没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基中加入苯酚作为碳源；使用法可以在⑥上获得单个菌落．
（4）采用固体培养基培养细菌时为什么要倒置培养？防止冷却过程中凝结形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
Ⅲ、急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌、病毒通过消化道进入人体导致的，因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施．
（5）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养．在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是检测培养基平板灭菌是否合格；
（6）分别取0.1mL已稀释了10³倍的水样分别涂布到三个琼脂固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为5.6×10⁸个个．
（7）噬菌斑（如图4）是在长满细菌的培养基上，由一个噬菌体侵染细菌后，不断裂解细菌产生的一个不长细菌的透明小圆区，它是检出噬菌体数量的重要方法之一．现利用连续取样、在培养基中培养的方法，测得噬菌体在感染大肠杆菌后数量变化曲线（图5）．下列有关该曲线的叙述中错误的是ABC （多选，填编号）
A．曲线a～b段噬菌体数量不变，说明此阶段噬菌体还没有开始侵染细菌
B．曲线a～b段细菌细胞中正旺盛地进行细菌 DNA 的复制和有关蛋白质的合成
C．由b到c对应时间内噬菌体共繁殖了10代
D．限制c～d段噬菌斑数量增加的因素最可能是细菌已经绝大部分被裂解．

Answer 1

分析 图1表示在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油．图2中的C表示化学结合法的固定化酶技术．图3表示无所谓的筛选与分离过程．图4表示稀释涂布平板法接种产生的菌落及噬菌斑．图5表示噬菌体在感染大肠杆菌后数量变化曲线．

解答 解：Ⅰ、（1）分离筛选出能分泌脂肪酶的微生物M，要使用以脂质为唯一碳源的选择培养基，故选：B．
（2）图2中的C表示化学结合法的固定化酶技术，该技术能使脂肪酶能够重复使用．
Ⅱ、（3）据图3分析，④的培养基中没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基中加入苯酚作为碳源，是④与⑤培养基的主要区别．
（4）微生物培养时需要将培养皿倒置的原因是防止冷却过程中凝结形成的水珠滴落在培养基上污染培养基．
Ⅲ、（5）对培养基进行空白培养的目的是检测培养基平板灭菌是否合格．
（6）根据题意，每升原水样中大肠杆菌数为（55+56+57）÷3÷0.1×1000×10³=5.6×10⁸个．
（7）A、曲线a～b段噬菌体数量增加，此阶段噬菌体已经开始侵染细菌，A错误；
B、曲线a～b段细菌细胞中可以进行细菌 DNA 的复制和有关蛋白质的合成，但对细菌的数量影响不明显，B错误；
C、由b到c对应时间内噬菌斑的数目增加了10倍，但不能证明噬菌体共繁殖了10代，C错误；
D、限制c～d段噬菌斑数量增加的因素最可能是细菌已经绝大部分被裂解，D正确．
故选：ABC．
故答案为：
（1）B
（2）酶的固定化    C
（3）④的培养基中没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基中加入苯酚作为碳源    平板划线法（或稀释涂布平板）
（4）防止冷却过程中凝结形成的水珠滴落在培养基上污染培养基
（5）检测培养基平板灭菌是否合格
（6）5.6×10⁸个
（7）ABC

点评 本题综合考查了微生物的营养物质、筛选与分离、接种与培养等知识，意在强化学生对微生物的实验室培养的相关过程的理解与运用．