Question

【题目】图1表示含有目的基因D的DNA片段，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：

（1）用限制酶SmaⅠ完全切割图1的DNA片段，产物中至少有_______种不同DNA片段。

（2）为了提高实验成功率，需要通过PCR技术扩增目的基因，以获得大量的目的基因，在此过程中，要有一段_________________，以便根据这一序列合成引物。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_______。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般先用添加抗生素B的培养基进行培养，然后将生长的菌接种到只含______的培养基中培养，可进一步筛选出含重组质粒的受体细胞。

（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若要将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，___________（是/否/不一定）能用BamHⅠ，为什么?__________。

Answer 1

【答案】3 已知目的基因的核苷酸序列 BamHⅠ 抗生素A 不一定 因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC

【解析】

分析图1：图中DNA片段含有2个限制酶MspⅠ切割位点，可被限制酶MspⅠ切割产生三种DNA片段，基因D两侧序列为GGATCC，可被限制酶BamHⅠ切割。

分析图2：质粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割。用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此含有重组质粒的大肠杆菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A。

（1）图1中DNA片段含有2个限制酶SmaⅠ切割位点，若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，产物中至少有3种不同DNA片段。

（2）PCR的原理是DNA双链复制；利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

（3）目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割。

（4）用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，用BamHⅠ不一定将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处含有GATC，不一定出现GGATCC。