Question

下图为绿色荧光小鼠制备流程图，Gfp是绿色荧光蛋白基因，请分析回答：

（1）构建表达载体需要的酶是：                         ，表达载体包含绿色荧光蛋白基因Gfp、           、        、终止子和复制原点等。
（2）图中载体上的NEO基因是一种抗生素抗性基因，图中步骤③所用的G418 是一种抗生素（对细胞有毒害作用），添加G418的目的是_                                  。
（3）图中所用的胚胎干细胞来自于               。
（4）图中步骤⑤要将细胞注射入图中囊胚的           位置，图中步骤⑥胚胎移植前要对代孕母鼠用激素处理，目的是               。
（5）可以使用          __方法在蛋白质水平上鉴定小鼠是否存在绿色荧光蛋白。

Answer 1

（1）限制性核酸内切酶、DNA连接酶、标记基因、启动子（2）筛选出导入目的基因的胚胎干细胞（3）早期胚胎或原始性腺（4）内细胞团  同期发情处理（5）抗原-抗体杂交

解析试题分析:（1）构建表达载体需要限制性核酸内切酶进行切割，目的基因与运载体结合也离不开DNA连接酶。基因表达载体必不可少的几部分包括标记基因、启动子、终止子和复制原点等。（2）导入目的基因的会表现出抗生素的抗性来，添加G418的目的是选出导入目的基因的胚胎干细胞。（3）胚胎干细胞可从早期胚胎或原始性腺中获得。（4）囊胚期的细胞已经开始分化为内细胞团和滋养层细胞。将目的基因要注入内细胞团的位置。对代孕的母鼠要用激素处理，目的是同期发情处理，处于相同的生理状态。（5）对目的基因的检测和鉴定分为三步：首先用DNA分子杂交技术检测是否插入目的基因；其次用分子杂交技术检测是否转录出来mRNA;最后用抗原-抗体杂交技术检测是否翻译成蛋白质。
考点：本题考查了基因工程的相关知识。意在考查考生的理解能力及理论联系实际，运用所学知识解决自然界中的一些生物学问题的能力。