Question

【题目】基因表达载体的构建是基因工程的核心。图中甲为限制酶EcoRⅠ的识别序列，图乙表示目的基因及限制酶切点，图丙表示目的基因上的DNA片段，图丁表示质粒。请回答下列问题：

（1）从供体真核生物的某组织中获取mRNA，并以此为模板反转录产生多种片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫____文库，从该文库中获得的目的基因_________（填“含”或“不含”）启动子、终止子、内含子。

（2）若用图甲所示的限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，就其专一性而言，切开的是G和A所在的两个_________之间的_________键，即图丙的②处。

（3）为了使目的基因和质粒定向连接，并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，应该选择的限制酶是PstⅠ和___________，如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含________基因，以利于筛选出含质粒的受体菌。

（4）PCR技术扩增图乙中的目的基因时，需要提供模板、Taq酶、_______（原料）、引物C和引物_________等条件。

Answer 1

【答案】cDNA 不含 核苷酸（脱氧核苷酸） 磷酸二酯键 EcoRⅠ 抗四环素 dNTP B

【解析】

基因工程的工具：

（1）限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

（2）DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。

（3）运载体：常用的运载体：质粒、噬菌体的衍生物、动植物病毒。

（1））以mRNA为模板，通过逆转录方法产生多种cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做cDNA（部分DNA）文库；从部分基因文库中获取的DNA没有启动子、内含子和终止子等。

（2）限制酶EcoRⅠ切开的是G和A所在的两个核苷酸（脱氧核苷酸）之间的磷酸二酯键键，即图丙的②处。

（3）为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受体细胞的筛选，提高重组效率，又使四环素抗性基因不被破坏，应该选择的限制酶是PstⅠ、EcoRⅠ。如果大肠杆菌是受体细胞，则其体内应不含抗四环素基因，以利于筛选出含质粒的受体菌。

（4）PCR技术扩增图乙中的目的基因时，需要提供模板、Taq酶、dNTP、引物C和引物B（由于DNA复制只能从5’到3’，所以应选择引物C和B）等条件。