Question

【题目】饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸梅的菌株的过程示意图。请分析作答。

（1）图示培养基中除了添加 以外，应含有碳源、氮源、水、其他无机盐等基本营养物质。

（2）接种以前要进行系列稀释操作，目的是在固体培养基表面形成 。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的 就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布三个平板，取其平均值。若将最后一个试管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培养后获得平均值是48个菌落，则lg土壤中含有此菌的菌株数是 。

（3）在样品稀释和涂布平板步骤中，下到选项不需要的是 （填序号）。

①酒精 ②培养皿 ③显微镜 ④无菌水

（4）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是 。

（5）产植酸梅的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。图中降解圈大小与植酸酶的 有关。实验结果显示A-E五种菌株中， 是产值酸酶最理想的菌株。分离并获得菌种后，若需长期保存，应使用 法。

Answer 1

【答案】（10分）（1）植酸钙 （2）单个菌落 菌落数 4．8×107 （2分）

（3）③ （4）培养基表面的菌悬液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（不易培养得到单个菌落）

（5）量与活性（全对给分） E 甘油管藏

【解析】

试题分析：（1）从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株需要使用含植酸钙的选择培养基,因此图示培养基中除了添加植酸钙以外，应含有碳源、氮源、水、其他无机盐等基本营养物质。

（2）接种以前要进行系列稀释操作，即采用稀释平板法在固体培养基表面形成单个菌落，以达到纯化菌种的。根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的菌落数就能大致推测出样品中的活菌数。若将最后一个试管中的菌液每次吸取 0．lmL涂布培养后获得平均值是48个菌落，则lg土壤中含有此菌的菌株数是48×10×103×102＝4．8×107个。

（3）在系列稀释操作中，需要用无菌水对样品稀释；涂布平板操作的程序为：将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中→取少量菌液滴加到培养基表面→涂布前需将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s→用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。综上所述，在样品稀释和涂布平板步骤中，不需要显微镜，即③。

（4）在涂布平板时，若滴加到培养基表面的菌悬液量过多，则会使培养基表面的菌悬液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，不易培养得到单个菌落，因此滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多。

（5）植酸钙的不溶解性使培养基中形成白色浑浊，产植酸酶的菌株会水解植酸钙，使菌落的周围形成透明降解圈，降解圈大小与植酸酶的量与活性有关。实验结果显示：在A-E五种菌株中，E菌落周围形成的透明降解圈最大，因此E菌株是产植酸酶最理想的菌株。若需长期保存分离并获得菌种，应使用甘油管藏法。