Question

【题目】下图1表示含有目的基因D的DNA片段及其中部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MpsⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶。它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。现要培育含目的基因D的大肠杆菌，请回答下列问题：

（1）为了提高试验成功率，需要通过PCR纩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该过程除需目的基因和dNTP （包括dATP、dGTP, dCTP、dTTP）之外还需提供______________。

（2）图2中，启动子的作用是______________．

（3）分别用4种限制酶切割图1中的DNA片段，能形成黏性末端的是______________。

（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是___________。为了提高重组质粒导入大肠杆菌的成功率，需将大肠杆菌用___________进行处理。

（5）为了筛选出成功导入含目的基因D的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌图3所示的培养基上培养，得到如图3的菌落。再将灭菌绒布按到培养基上，使绒布面沾上菌落，然后将绒布按到图4所示的培养基上培养，得到如图4的结果（空圈表示与图3对照无菌落的位置）。请推测：图3培养基里含的抗生素是_ _，

图4中生长的大肠杆菌中是否有目的基因D？______________。

Answer 1

【答案】（1）热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）和引物

（2）与RNA聚合酶结合，驱动基因转录出mRNA

（3）MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ

（4）BamHⅠ Ca2+

（5）抗生素B 抗生素A 不含

【解析】（1）PCR反应条件有：目的基因、缓冲溶液，以及热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）和引物。

（2）启动子的作用是与RNA聚合酶结合，驱动基因转录出mRNA。

（3）SmaⅠ识别的序列为GGGCCC，切割会产生平末端，其他的酶MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ都能产生粘性末端。

（4）由图1可知，目的基因两侧是GGATCC序列，该序列是限制酶BamHⅠ的识别序列，因此要将质粒和目的基因D连接形成重组质粒，应选用限制酶BamHⅠ切割。

（5）用限制酶BamHⅠ切割质粒后，用限制酶BamHⅠ切割破坏了抗生素A抗性基因，但没有破环抗生素B抗性基因，因此首先用含有抗生素B的培养基培养大肠杆菌，能生存下来的是含有普通质粒和重组质粒的大肠杆菌；再用含有抗生素A的培养基培养，能生存下来的是含有普通质粒的大肠杆菌．最后能在培养皿1上生存，但不能在培养皿2上生存的大肠杆菌菌落进行培养，即可得到含重组质粒的大肠杆菌．图3中空心圈在图2中对应的位置是含目的基因的重组质粒的大肠杆菌的菌落。