[题目]2019年1月24日.中科院神经科学研究所的科学家经过两年努力.利用CRISPR/Cas9技术.成功得到五只BMAL1基因被敲除的克隆猴.可作为研究生物节律紊乱等人类疾病的动物模型.如图为体细胞核移植技术培育食蟹猴的操作过程.回答下列问题.(1)获得食蟹猴的体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植.原因 .(2)进行过程� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】2019年1月24日，中科院神经科学研究所的科学家经过两年努力，利用CRISPR/Cas9技术，成功得到五只BMAL1基因被敲除的克隆猴，可作为研究生物节律紊乱等人类疾病的动物模型。如图为体细胞核移植技术培育食蟹猴的操作过程，回答下列问题。

（1）获得食蟹猴的体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植，原因___________。

（2）进行过程①时，为提供成纤维细胞培养所需的无菌无毒环境，应定期更换培养基，其目的是___________。

（3）过程③是利用___________法将成纤维细胞注入食蟹猴去核的减数第二次分裂中期的卵母细胞中。

（4）过程⑤的实质是早期胚胎在___________条件下空间位置的转移。胚胎移植的方法分为_______两种。

（5）CRISPR/Cas9是生物学研究中的一项革命性技术, 其原理是由一条单链向导RNA引导核酸内切酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割．通过设计向导RNA中20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割（见图）

向导RNA可在___________催化下合成。Cas9蛋白的作用是破坏DNA特定位点核苷酸之间的磷酸二酯键。将Cas9基因导入猴细胞时需要构建基因表达载体，目的是_____________。

【答案】体细胞分化程度高，恢复其全能性较难防止成纤维细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害显微注射相同生理环境手术法和非手术法 RNA聚合酶使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代，使目的基因能表达和发挥作用

【解析】

动物细胞培养的条件为无菌、无毒，需要适宜的温度和PH，培养基中除正常的有机和无机营养外，还需加入血浆（血清）等一些天然成分；另外还需要气体条件，即加95%的空气和5％CO2，其中5％的CO2的作用是维持培养液的pH值。将细胞核导入动物细胞常用显微注射法。

（1）由于体细胞分化程度高，恢复其全能性较难，所以体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植。

（2）动物细胞培养为无菌、无毒的环境，可在培养液中加入抗生素，或定期更换培养液，防止成纤维细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。

（3）由图可知，过程③是利用显微注射法将成纤维细胞注入食蟹猴去核的减数第二次分裂中期的卵母细胞中。

（4）过程⑤为胚胎移植，实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移。胚胎移植的方法分为手术法和非手术法两种。

（5）RNA的形成需要RNA聚合酶的催化。构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并遗传给下一代，使目的基因能表达和发挥作用。

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②将无水CaCl2 溶解在蒸馏水中，配成CaCl2 溶液；

③加热溶解海藻酸钠，此过程应采用______,防止海藻酸钠焦糊；

④海藻酸钠溶液冷却至常温再加入已活化的酵母细胞，充分搅拌并混合均匀；

⑤用注射器将海藻酸钠和酵母细胞的混合物缓慢滴入CaCl2 溶液中。

（3）该实验小组用如图所示的装置来进行葡萄糖发酵。a是固定化酵母，b是反应柱。

①从上端漏斗中加入反应液的浓度不能过高的原因是______。

②要想得到较多的酒精，加入反应液后的操作是______活塞1和______活塞2。

③装置中的长导管起的作用是______。

④使用固定化酵母进行发酵的突出优点是______

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（1）已知人t-PA基因第84位半胱氨酸的编码序列（即模板链的互补链序列）为TGT，而丝氨酸的密码子为UCU，因此突变基因编码该氨基酸的编码序列应设计为_________。

（2）若获得的t-PA突变基因如图1所示，那么质粒pCLY11需用限制酶_________和_______切开，才能与t-PA突变基因高效连接。

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