Question

【题目】近期，5只生物钟紊乱的体细胞克隆猴登上中国综合英文期刊《国家科学评论》封面，标志着中国体细胞克隆技术走向成熟。下图为克隆猴的步骤，请回答下列问题：

（1）在各级神经中枢中，与猴子生物节律控制有关的中枢位于________________。除了脑部主生物钟外，在肝脏、胰脏等器官中还存在局部生物钟，敲除猴子肝脏细胞中的生物钟基因后，出现低血糖症状，其原因可能是______________________________________________。

（2）核移植前需将A猴卵母细胞培养至_________________期，并进行去核操作，其目的是__________________________________________。从细胞水平分析，与取B猴体细胞的细胞核进行移植相比，直接将B猴体细胞注人去核A猴卵母细胞的优势是________________________。

（3）重组细胞进行体外培养，需要气体环境和无菌、无毒的环境，其中前者需要的气体主要是_____________；后者的具体操作有_______________________________(答三点)。

Answer 1

【答案】下丘脑 肝脏细胞中的肝糖原分解产生葡萄糖并进入血液中，受生物钟基因调控 减数第二次分裂中 保证克隆猴的遗传物质主要来自B猴 避免取核过程对核造成损伤 O2和CO2 对培养皿和所有培养用具进行无菌处理；在培养液中添加一定量的抗生素；定期更换培养液

【解析】

动物细胞培养需要满足以下条件

（1）充足的营养供给--微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。

（2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。

（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。

（4）气体环境：95%空气+5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

（1）与生物节律控制有关的中枢位于下丘脑。除了脑部主生物钟外，在肝脏、胰脏等器官中还存在局部生物钟，敲除猴子肝脏细胞中的生物钟基因后，出现低血糖症状，其原因可能是肝脏细胞中的肝糖原分解产生葡萄糖并进入血液中，受生物钟基因调控。

（2）核移植前需将A猴卵母细胞培养至减数第二次分裂中期，并进行去核操作，其目的是保证克隆猴的遗传物质主要来自B猴。从细胞水平分析，与取B猴体细胞的细胞核进行移植相比，直接将B猴体细胞注人去核A猴卵母细胞可以避免取核过程对核造成损伤。

（3）重组细胞进行体外培养，需要的气体环境主要是O2和CO2；保证无菌无毒环境的具体操作有对培养皿和所有培养用具进行无菌处理；在培养液中添加一定量的抗生素；定期更换培养液。