Question

4．如图是克隆羊的培育流程图，根据所学知识回答下列问题．

（1）培育克隆羊时用到的卵母细胞可以从屠宰场收集，并在体外培养到减数第二次分裂中期．
（2）从供体羊中取上皮细胞，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，然后进行分散培养．整个过程必须保证细胞处于无菌无毒的环境中，所需营养物质要与体内基本相同．进行细胞培养时，通常采用培养皿或者松盖培养瓶，将其置于含95%的空气和5%CO₂的混合气体的培养箱中进行培养．
（3）通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还会将第一极体一并吸出．
（4）去核的卵母细胞与供体细胞通过电刺激后融合，供体核进入受体卵母细胞，构建成重组胚胎，融合后的重组胚胎，需要用物理或化学的方法进行激活，使其完成细胞分裂和发育进程．
（5）用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，因为10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型
（6）将重组胚胎发育到一定阶段，移植到同种的且生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育，最后形成克隆羊．移入的胚胎能够存活，是因为代孕子宫并不会对其发生免疫排斥反应，同时能够与受体子宫建立正常的生理和组织联系．
（7）欲培养高产奶山羊这一优良品种，对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的滋养层细胞进行鉴定，一般采用SRY-PCR方法，选择出现阴（填“阳”或者“阴”）性反应的雌性胚胎进行移植．

Answer 1

分析 1、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理（选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体．用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理）；②配种或人工授精；③对胚胎的收集、检查、培养或保存（对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑椹或胚囊胚阶段）；④对胚胎进行移植；⑤移植后的检查．
2、胚胎移植的生理学基础：
①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的．这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境．
②早期胚胎在一定时间内处于游离状态．这就为胚胎的收集提供了可能．
③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应．这为胚胎在受体的存活提供了可能．
④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响．
3、动物细胞培养条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物．
（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质．
（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4．
（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO₂（维持培养液的PH）．

解答 解：（1）体外受精时，卵母细胞需在体外培养到减数第二次分裂中期．
（2）从供体羊中取上皮细胞，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，然后进行分散培养．整个过程必须保证细胞处于的环境中，所需营养物质要与体内基本相同．进行细胞培养时，通常采用培养皿或者松盖培养瓶，将其置于含95%的空气和5%CO₂的混合气体的培养箱中进行培养．
（3）通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还会将第一极体一并吸出．
（4）去核的卵母细胞与供体细胞可以通过电刺激融合，供体核进入受体卵母细胞，构建成重组胚胎，融合后的重组胚胎，需要用物理或化学的方法进行激活，使其完成细胞分裂和发育进程．
（5）因为10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型，用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞．
（6）将重组胚胎发育到一定阶段，移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育，最后形成克隆羊．移入的胚胎能够存活，是因为代孕子宫并不会对其发生免疫排斥反应，同时能够在子宫内建立正常的生理和组织联系．
（7）欲培养高产奶山羊这一优良品种，对移植前的胚胎进行性别鉴定时，宜取囊胚期的滋养层细胞进行鉴定，一般采用SRY-PCR方法，选择出现阴性反应的雌性胚胎进行移植．
故答案为：
（1）减数第二次分裂中
（2）胰蛋白酶或胶原蛋白酶 无菌无毒 95%的空气和5%CO₂
（3）显微操作  第一极体  
（4）电刺激 
（5）10代以内的细胞能保持正常的二倍体核型
（6）生理状态  免疫排斥反应  生理和组织
（7）滋养层   阴

点评 本题考查细胞工程和胚胎工程的相关知识，要求考生识记动物细胞培养的过程及条件；识记体外受精的过程；识记胚胎移植的基本程序，掌握胚胎移植的生理学基础，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查．