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    【题目】下表是某同学列出的分离土壤中微生物培养基的配方数据表，据此回答下列问题：

    培养基配方

    含量

    KH2PO4

    1.4g

    Na2HPO4

    2.1g

    MgSO47H2O

    0.2g

    葡萄糖

    10.0g

    尿素

    1.0g

    琼脂

    15.0g

    将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

    （1）培养微生物的培养基中，一般都含有碳源、氮源、___________________等营养物质。若用于培养乳酸菌，培养基中除上述营养物质外，还需要添加_____________________。细菌能利用尿素作为氮源，是由于其能合成_____________________酶。

    （2）在对分离的能分解尿素的细菌进行鉴定时，还需在培养基中加入______________指示剂。接种前一般采取_______________对培养基进行灭菌。

    （3）某同学在4个培养基上分别接种稀释倍数为105的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为161、155、158、170个，则每毫升原土壤样液中尿素分解菌的数量为_________________。某同学在纯化土壤中的尿素分解菌时，培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是__________________。

    （4）常采用________________法将纯化得到的目的菌长期保存。

    【答案】 水和无机盐 维生素 脲 酚红 高压蒸汽法 1.61×108 菌液浓度过高（土壤溶液稀释不够） 甘油管藏

    【解析】试题分析：培养微生物时，培养基中需要加入碳源、氮源、无机盐、水，还需要满足微生物生长对pH，特殊营养物质以及氧气的要求。如培养乳酸菌需要加入维生素，培养霉菌需要把pH值调到酸性等。能够分解利用尿素的细菌，其细胞内含有脲酶，可以把尿素分解成氨，提供N源，进一步利用，只含有尿素作为N源的培养基对微生物具有选择作用。

    （1）培养微生物的培养基中，一般都含有碳源、氮源、水和无机盐等营养物质。若用于培养乳酸菌，培养基中除上述营养物质外，还需要添加维生素。题干指出从土壤中分离的微生物的培养基，其中尿素是作为唯一氮源，说明该微生物能分泌脲酶分解尿素。

    （2）能利用尿素中的氮源，以尿素为唯一氮源且含酚红的培养基可以选择和鉴别尿素分解菌。对培养基灭菌一般采用高压蒸汽灭菌法。

    （3）纯化微生物可以用稀释涂布法和平板划线法，其中稀释涂布法能用于微生物的计数。1毫升原土壤样液中上述微生物数量=（161+158+170+155）÷4×105÷0.1=1.61×109个。若在纯化土壤中的尿素分解菌时，培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是菌液浓度过高。

    （4）常采用甘油管藏法将纯化得到的目的菌长期保存。

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