Question

20．如图所示，质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（X^R）和四环素抗性基因（Y^R）．其中，X^R内部含有限制酶KasI识别序列，Y^R内部含有限制酶FseI、HpaII、
NaeI、NgoMIV识别序列，且这些识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．
（1）质粒PBR322的本质是闭环双链DNA．
FseI、HpaII、NaeI、NgoMIV中限制酶的作用特点是识别DNA特定的序列并在特定位点切割．
（2）NaeI酶切目的基因和质粒，加入DNA连接酶连接后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作．之后，受体细胞的类型包含ABD（多选）
A．抗青霉素、抗四环素         B．抗青霉素、不抗四环素
C．不抗青霉素、抗四环素        D．不抗青霉素、不抗四环素
（3）若用KasI和FseI联合酶切上述重组质粒，则可能产生的酶切片段数A．
A.2             B．3            C．4              D．5
（4）动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是B．
A．受精卵能使目的基因高效表达B．受精卵可发育成动物个体
C．受精卵基因组更易接受DNA的插入D．受精卵尺寸较大，便于DNA导入操作
（5）若目的基因模板链中的TGA序列对应1个密码子，翻译时识别该密码子的tRNA上相应的碱基序列是UGA．通过筛选出的受体细胞内，目的基因能成功表达的原因是生物界共用一套遗传密码子．

Answer 1

分析 分析题图：质粒PBR322上含有青霉素抗性基因（X^R）和四环素抗性基因（Y^R），其中X^R内部含有限制酶KasⅠ识别序列，Y^R内部含有限制酶FseⅠ、HpaⅡ、NaeⅠ、NgoMⅣ识别序列，五种酶的识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．由于限制酶具有特异性，因此用KasⅠ和FseⅠ联合酶切重组质粒，KasⅠ在X^R可以切开一个位点、FseⅠ在Y^R也可以切开一个位点，这样只能得到2段DNA片段．

解答 解：（1）质粒的本质是双链环状DNA分子．由于限制酶具有特异性，只能识别DNA特定的序列并在特定位点切割．
（2）将图中切开的质粒与目的基因溶液混合，加入DNA连接酶连接后，可能有以下三种情况：
①质粒自身环化或质粒与质粒结合，将它们导入受体细胞后，由于X^R、Y^R基因都没有被破坏，因此表现为X^R、Y^R，A正确；
②有的质粒与目的基因连接形成重组质粒，这种重组质粒导入受体细胞后，由于Y^R基因被破坏，只有X^R抗性，表现为X^R、Y^S，B正确；
③目的基因自身环化或目的基因与目的基因结合，将它们导入受体细胞后，由于没有抗性基因，因此表现为X^S、Y^S，D正确．
故选：ABD．
（3）根据题意，X^R内部含有限制酶KasⅠ识别序列，Y^R内部含有限制酶FseⅠ、HpaⅡ、NaeⅠ、NgoMⅣ识别序列，五种酶的识别序列在整个质粒上均仅有一处，目的基因内部不存在这些识别序列．因此用KasⅠ和FseⅠ联合酶切重组质粒，KasⅠ在X^R可以切开一个位点、FseⅠ在Y^R也可以切开一个位点，这样只能得到2段DNA片段，故选A．
（4）因为受精卵的全能性高，可以发育成动物个体，因此，动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞．故选：B．
（5）根据碱基配对原则，TGA序列对应的密码子是ACU，密码子ACU对应的tRNA上的反密码子是UGA．所有的生物都共用一套密码子，所以目的基因能成功表达能藻受体细胞中成功表达．
故答案为：
（1）闭环双链DNA    识别DNA特定的序列并在特定位点切割
（2）ABD
（3）A
（4）B
（5）UGA　　　　生物界共用一套遗传密码子

点评 本题结合图解，考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节；能结合图中和题中信息准确答题，有一定难度，属于考纲理解和应用层次的考查．