Question

【题目】已知某传染性疾病的病原体为RNA病毒，该病毒表面的A蛋白为主要抗原，制备抗A蛋白抗体的部分流程如下图．
请回答：
（1）①代表的是过程．为获得A基因表达载体，需用酶对A基因和运载体进行切割．将A基因表达载体导入动物细胞常用的方法是 ．
（2）利用PCR技术扩增A基因时，设计引物序列的主要依据是 ， 加入引物的作用是 ．
（3）与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制等条件．
（4）过程③采用的技术是 ， 获得的X叫细胞．

Answer 1

【答案】
（1）逆转录；限制；显微注射法
（2）A基因两端的部分核苷酸序列；与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸
（3）温度
（4）动物细胞融合；杂交瘤
【解析】解：（1）由以上分可知①是逆转录过程．构建基因表达载体时，首先需要用同种限制酶切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法．（2）利用PCR技术扩增A基因时，根据A基因两端的部分核苷酸序列设计引物序列，加入引物的作用是与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸．（3）PCR扩增目的基因的过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链．因此，与体内DNA复制相比较，PCR反应要在一定的缓冲溶液中才能进行，并且要严格控制温度等条件．（4）③过程需要采用动物细胞融合技术，根据图中信息可知X为杂交瘤细胞． 所以答案是：（1）逆转录 限制 显微注射法（2）A基因两端的部分核苷酸序列 与A基因单链相应互补序列结合，然后再DNA聚合酶作用下进行延伸（3）温度（4）动物细胞融合 杂交瘤
【考点精析】通过灵活运用基因工程的原理及技术和单克隆抗体的制备，掌握基因工程的原理是利用DNA重组技术；对免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴细胞；同时用动物细胞培养的方法培养骨髓瘤细胞并提取；促使它们细胞融合；在特定的选择培养基上筛选出融合的杂种细胞；然后对它进行克隆化培养和抗体检测；最后将杂交瘤细胞在体外做大规模培养或注射入小鼠腹腔内增殖，从细胞培养液或小鼠腹水中可得到大量的单克隆抗体即可以解答此题．