[题目]图1是目的基因.图2为应用于基因工程中改造后的质粒PZyj.其长度为4 692 bp(bp即碱基对).其中wzh基因能合成某种化合物.其表达产物能使细菌白色菌落和培养基中化合物A反应呈红色.tsr为硫链丝菌素(一种抗生素)抗性基因,而MspI.EcoR I.BamH I为限制酶.括号中数字表示该酶位于质粒的位置.其中BamH I识别的碱基序列� 题目和参考答案——青夏教育精英家教网—

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【题目】图1是目的基因，图2为应用于基因工程中改造后的质粒PZyj，其长度为4 692 bp（bp即碱基对），其中wzh基因能合成某种化合物，其表达产物能使细菌白色菌落和培养基中化合物A反应呈红色，tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因；而MspI、EcoR I、BamH I为限制酶，括号中数字表示该酶位于质粒的位置，其中BamH I识别的碱基序列和酶切位点（箭头表示）为。启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA。请回答下列问题：

（1）用EcoR I酶对质粒切割后DNA的片段长度为______bp，EcoR I酶的作用特___________________。

（2）用MspI酶处理质粒PZyj后，酶切位点之间最短的DNA片段的长度为 ___________bp，将上述含Msp I酶DNA片段的溶液用高温处理后，再加DNA连接酶作用半小时，若仅考虑两两相连，则有___________种连接产物。

（3）将质粒PZyj和目的基因用限制酶处理后进行连接，形成重组质粒。该过程应选用___________酶，保证质粒与目的基因具有相同的黏性末端；该质粒中tsr基因和wzh基因的作用是_________。

（4）为了筛选出成功导入含目的基因的重组质粒的细菌，应将细菌接种于含___________（填物质名称）培养基上培养。

【答案】

（1）4 692（2分）识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂（3分）

（2）586（2分） 6（2分）

（3）BamH I（2分）作为标记基因，便于筛选含目的基因的受体细胞（2分）

（4）化合物A和硫链丝菌素（2分）

【解析】

（1）PZyj质粒上EcoR I酶的酶切位点只有一个，经过切割，质粒由环状变为链状，质粒上碱基数量不变。（2）PZyj质粒上Msp I酶的酶切位点有三个，从图上标注的碱基数目的位置可以看出，在1 270到1 857之间的片段最短，碱基对是从1 270开始到1 857终止，共有586个碱基对；由于切割形成三个不等长片段的黏性末端都是一样的，所以用DNA连接酶使其相互连接的种类有：同种DNA片段相连和异种DNA片段连接，共有6种。

（3）构建重组质粒首先要考虑目的基因和质粒是否有共同的限制酶切割位点，从图中可看出BamH I是目的基因和PZyj质粒共有的酶；题干中已经说明tsr基因和wzh基因是作为标记基因，其目的是便于筛选含目的基因的受体细胞。

（4）使用含有化合物A和硫链丝菌素的选择培养基，含tsr基因和wzh基因的菌在培养基上呈红色，否则是白色。

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