Question

16．如图为培育转基因奶牛获得人血清白蛋白（HSA）的流程．回答下列问题：

（1）PCR扩增HSA基因使用的酶是热稳定DNA聚合酶（Taq酶、耐高温DNA聚合酶），构建含有人HSA基因表达载体时所用的工具酶有限制酶和DNA连接酶．
（2）图中培育转基因动物属于有性（填“有性”“无性”）繁殖，过程①常用的方法是显微注射法．在过程②进行之前，需对早期胚胎进行性别鉴定，可取胚胎细胞进行DNA分析，其采用的基因探针来
自性（填“常”“性”）染色体．
（3）检测牛奶中是否含有人血清白蛋白，可采用抗原-抗体杂交技术，但在转基因牛乳汁中却没有检测到HSA的存在，若从构建基因表达载体的角度分析，最可能的原因是位于目的基因前后的启动子和终止子设计不理想，导致目的基因不能进行表达．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）PCR技术是在较高温度下进行的，因此需要使用热稳定DNA聚合酶；构建基因表达载体时，首先需要用限制面前切割含有目的基因的外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA．
（2）图中培育转基因动物时经过体外受精，因此属于有性繁殖；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；在过程②进行之前，需对早期胚胎进行性别鉴定，可取胚胎细胞进行DNA分析，其采用的基因探针来自性染色体．
（3）检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质可采用抗原-抗体杂交技术．目的基因的正常表达离不开启动子和终止子，若在转基因牛乳汁中却没有检测到HSA的存在，从构建基因表达载体的角度分析，最可能的原因是位于目的基因前后的启动子和终止子设计不理想，导致目的基因不能进行表达．
故答案为：
（1）热稳定DNA聚合酶（Taq酶、耐高温DNA聚合酶）      限制酶和DNA连接酶
（2）有性     显微注射法     性
（3）抗原-抗体杂交     位于目的基因前后的启动子和终止子设计不理想，导致目的基因不能进行表达

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．