Question

9．小鼠的某种抗体由轻链和重链组成，科学家将编码轻链和重链的基因分别导入两个不同的烟草植物体内，然后让两株植物进行杂交就能获得可同时编码轻链和重链两种多肽的植株，即合成小鼠抗体的转基因植物．回答下列问题：
（1）若要获取小鼠的编码轻链和重链的基因，可以先提取小鼠浆细胞中编码两条链的mRNA，然后通过逆转录 过程获取小鼠的cDNA，并利用PCR技术对目的基因进行扩增．
（2）在构建基因表达载体时，需要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶，基因表达载体中的目的基因两端的序列分别是启动子和终止子．
（3）用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，常常将目的基因插入到农杆菌Ti质粒的T-DNA
上．检测目的基因是否导入受体细胞可用DNA分子杂交技术，一般用标记的目的基因作探针．
（4）若想大规模培育能合成小鼠抗体的转基因植物，可采用植物培养技术．

Answer 1

分析 基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成．
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等．
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法．
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等．

解答 解：（1）以RNA为模板合成DNA的过程为逆转录；PCR技术可在体外扩增目的基因．
（2）在构建基因表达载体时，首先需要限制酶切割运载体和含有目的基因的外源DNA分子，其次还需要用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子．基因表达载体中的目的基因两端的序列分别是启动子和终止子．
（3）农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上．根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上．检测目的基因是否导入受体细胞可用DNA分子杂交技术，一般用标记的目的基因作探针．
（4）植物培养技术可以快速繁殖优良植物品种．
故答案为：
（1）逆转录      PCR
（2）限制酶和DNA连接酶       启动子     终止子
（3）T-DNA      目的基因
（4）植物培养

点评 本题考查基因工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能结合所学的知识准确答题．