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    近20年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室的一种常规实验手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如图)，在短时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，从而使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。

    (1)加热使DNA双链间的__________键完全打开，称为________；而在细胞中是在________酶的作用下进行的。

    (2)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入________种特定的引物。当温度降低至55 ℃时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是____________。

    (3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的________和________，前者由________自动调控，后者则靠____来维持。

    (4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是________。

     

    【答案】

    (1)氢　解旋　解旋   (2)两　3′　从子链的5′端向3′端延伸  (3)温度　酸碱度　PCR仪　缓冲液  (4)1/8

    【解析】PCR技术加热是使DNA双链间氢键断开，称为解旋，在细胞内是由解旋酶进行的；将一个用15N标记的DNA分子放入试管中连续复制四次，会得到24=16个DNA分子，含15N的DNA分子有两个（原因半保留复制），则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是2/16=1/8。

     

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    (1)加热使DNA双链间的__________键完全打开，称为________；而在细胞中是在________酶的作用下进行的。
    (2)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入________种特定的引物。当温度降低至55 ℃时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是____________。
    (3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的________和________，前者由________自动调控，后者则靠____来维持。
    (4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是________。

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    （1）加热使DNA双链间的______键完全打开，称为_______；而在细胞中是在_______酶的作用下进行的。
    （2）如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入__________种特定的引物。当温度降低至55℃时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的__________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是_________。
    （3）PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的_________和________，前者由________自动调控，后者则靠_______来维持。
    （4）通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是____________。

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    基因工程自20世纪70年代兴起后，发展迅猛，成果显著。
    Ⅰ利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是       ______。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用            处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交，该杂交技术称为       __________   。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成蛋白质，常用______________________技术。
    Ⅱ近10年来，PCR技术（多聚酶链式反应）成为分子生物学实验室的一种常规手段，下图为PCR原理示意图，据图回答问题。

    （1）基因工程中，利用PCR技术来________________，PCR技术依据的原理是DNA的半保留复制，生物体内也能完成DNA的复制，但有所不同，图中A过程称为____________，在生物体内需要____________才能完成。图中B 过程的完成需要_________等条件（3分）。
    （2）若DNA样品的长度为100个碱基对，且A占15%，则完成三次循环，共需要提供的胞嘧啶脱氧核苷酸___________个。

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    （1）加热使DNA双链间的______键完全打开，称为_______；而在细胞中是在_______酶的作用下进行的。

    （2）如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入__________种特定的引物。当温度降低至55℃时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的__________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是_________。

    （3）PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的_________和________，前者由________自动调控，后者则靠_______来维持。

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